Evaluación de la Calidad de la Decocción Estándar de Dengzhanhua Basada en el Atlas de Huellas Dactilares y la Prueba de Actividad Antioxidante In Vitro
Dengzhan Hua, también conocida como Dengzhan Xixin, es una planta de la familia Asteraceae llamada Erigeron breviscapus (Vant.) Hand- Mazz. La planta entera seca se cosecha en primavera y otoño y está incluida en la edición de 2020 de la Farmacopea China. Tiene los efectos de promover la circulación sanguínea, desbloquear las colaterales, aliviar el dolor, disipar el viento y disipar el frío. Estudios farmacológicos modernos han demostrado que la Scutellaria baicalensis tiene efectos neuroprotectores, protectores cardiovasculares y cerebrovasculares, antioxidantes, anticancerígenos y otros efectos farmacológicos. El cáncer y las enfermedades cardiovasculares y cerebrovasculares están estrechamente relacionados con el daño oxidativo causado por el exceso de especies reactivas del oxígeno, como los radicales aniónicos superóxido, los radicales hidroxilo y los radicales lipídicos en el organismo. La ingesta adecuada de antioxidantes puede eliminar el exceso de radicales libres en el organismo, lo que resulta beneficioso para la salud humana y la prevención y el control de enfermedades. La bibliografía indica que Lamplighter tiene una excelente actividad antioxidante. La composición química del encendedor de lámparas es compleja, y la relación entre la composición química y el efecto de la dosis activa aún no está muy clara. La huella química de la medicina tradicional china se ha utilizado ampliamente para la evaluación de la calidad de la medicina china debido a su capacidad para caracterizar los componentes de las sustancias contenidas en la medicina china, lo que se ajusta a la naturaleza global y difusa de la teoría de la medicina tradicional china. Sin embargo, su aplicación es cada vez más limitada, ya que sólo refleja la información química de la medicina tradicional china y no logra establecer una relación con sus efectos terapéuticos. En 2020, el Centro de Evaluación de Medicamentos de la Administración Nacional de Productos Médicos publicó las "Directrices técnicas para la detección de los efectos biológicos de la medicina tradicional china (ensayo)", abogando por el establecimiento de métodos de control de calidad relacionados con la actividad para garantizar la seguridad y la eficacia de la medicina tradicional china en las aplicaciones clínicas. El estudio de la "relación espectro-efecto" de la medicina tradicional china puede vincular estrechamente la expresión característica general de los principios activos con los efectos de múltiples indicadores y objetivos, y puede determinar razonablemente la base farmacológica de la sustancia, lo que también está en consonancia con las características de la medicina tradicional china.

La decocción estándar de medicina china es una decocción única de medicina tradicional china preparada mediante procesos estandarizados, utilizada para la medicación clínica estandarizada, que garantiza la precisión de la medicación y la coherencia de la medición. Sirve como referencia estándar para medir si las partículas de la fórmula de la medicina china son básicamente coherentes con la decocción clínica. La propuesta de la decocción estándar proporciona un punto de referencia material para lograr la consistencia de la calidad de las formas de dosificación basadas en la decocción de la medicina tradicional china y establecer métodos eficaces de evaluación de la calidad. Este artículo toma la decocción estándar de Dianzhanhua como objeto de investigación y verifica su efecto antioxidante mediante experimentos in vitro de eliminación de radicales libres DPPH y ABTS. Al mismo tiempo, se establece su huella digital por HPLC y se determina el contenido total de flavonoides; se utiliza el análisis de correlación bivariante para buscar componentes antioxidantes significativamente correlacionados, se realiza el análisis de conglomerados (AC) y el análisis de componentes principales (ACP) en los componentes seleccionados, y se utiliza además el análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales ortogonales (OPLS-DA) para identificar componentes diferenciales; se evalúa la calidad de su efecto antioxidante para proporcionar una base para el control de calidad del Lamplighter y sus preparados.

 

 

Los radicales libres DPPH y ABTS se utilizan a menudo como indicadores para medir la actividad antioxidante in vitro de los principios activos. El método DPPH determina la capacidad antioxidante de los materiales medicinales uniéndose a sustancias con electrones de par solitario, mientras que el método ABTS determina la capacidad antioxidante uniéndose a sustancias hidrofílicas y lipofílicas. Entre los principales principios activos de la Scutellaria baicalensis se encuentran los flavonoides. En este estudio, se determinó que el contenido total de flavonoides de 16 lotes de decocción estándar de Scutellaria baicalensis era de 2,85-11,28mg/mL. Su actividad antioxidante in vitro se evaluó mediante la eliminación de los radicales libres DPPH y ABTS como indicadores antioxidantes. El valor IC50 de DPPH fue de 1,00-3,39mg/mL, y el valor IC50 de ABTS fue de 0,254-2,16mg/mL, lo que indica que la capacidad de la decocción estándar de Scutellaria baicalensis para eliminar los radicales libres ABTS es mayor que la de eliminar los radicales libres DPPH. Mediante el análisis de correlación bivariada de Pearson, se descubrió que las dos actividades antioxidantes in vitro (valores IC50) estaban correlacionadas negativamente de forma significativa con el contenido total de flavonoides (P<0,01), con coeficientes de correlación de -0,714 y -0,841, respectivamente, lo que indica que cuanto menor es el valor IC50 y mayor el contenido total de flavonoides, mayor es la capacidad antioxidante del extracto. Por lo tanto, el contenido de flavonoides totales es uno de los indicadores que afectan a la fuerza antioxidante de Scutellaria baicalensis, y puede ser utilizado como un indicador para evaluar la fuerza antioxidante de Scutellaria baicalensis.
En el proceso de establecimiento de espectros de huellas dactilares, se investigaron experimentalmente las columnas cromatográficas Agilent ZORBAX-SB C18, Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 y Agilent Extend C18. Basándose en la comparación del número de picos cromatográficos y el grado de separación, se descubrió que Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 tenía un mejor rendimiento.Se investigaron los sistemas binarios de ácido fórmico 0,1% agua metanol, ácido fórmico 0,1% agua acetonitrilo y ácido fórmico 0,1% agua acetonitrilo tetrahidrofurano con diferentes gradientes. Se comprobó que el efecto de separación del ácido fórmico 0,1% agua acetonitrilo tetrahidrofurano era mejor y la línea de base era relativamente estable; examinando la longitud de onda de detección de 200-400 nm, los resultados mostraron que los picos cromatográficos obtenidos cambiando la longitud de onda en diferentes periodos de tiempo eran múltiples y la línea de base era estable. Por último, se determinó que la longitud de onda era de 252 nm de 0 a 9 minutos y de 330 nm de 9 a 60 minutos.
En los últimos años, la literatura sobre los espectros de huellas dactilares de hierbas medicinales como Scutellaria baicalensis ha utilizado principalmente el método HPLC, que evalúa la similitud de los espectros de huellas dactilares y determina los picos comunes; La literatura utilizó CA y PCA para el reconocimiento de patrones químicos de los espectros de huellas dactilares y clasificó los materiales medicinales, pero no llevó a cabo un análisis en profundidad de las razones de las diferencias. Sobre la base del espectro de huella dactilar de la hierba medicinal Lampyridis en la etapa inicial de este artículo, se estableció un espectro de huella dactilar de la decocción estándar de Lampyridis, con una similitud de 0,770-0,993, y se obtuvieron 21 picos comunes. Se identificaron ocho componentes conocidos utilizando la sustancia de referencia. En este estudio se utilizó el análisis de correlación bivariada para examinar 10 picos cromatográficos, a saber, los picos 3, 4 y 6 (ácido clorogénico), los picos 7, 11 y 13 (escutelarina B), el pico 14 (ácido isoclorogénico B), el pico 15 (escutelarina A) y los picos 17 y 19 (ácido isoclorogénico C), que se correlacionaron negativamente de manera significativa con la capacidad de eliminar los radicales libres DPPH (es decir, cuanto mayor es el área del pico común, menor es el valor IC50). Los coeficientes de correlación Person fueron -0,552, -0,733, -0,626 y -0, respectivamente 665, -0,537, -0,518, -0,767, -0,754, -0,541 y -0,748, lo que indica que las sustancias químicas correspondientes son los principales ingredientes activos en el barrido de radicales DPPH. Trece picos cromatográficos, incluidos los picos 3, 4, 6, 7, 8, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18 (ácido isoclorogénico A) y 19, se correlacionaron negativamente de forma significativa con el barrido de radicales libres ABTS. Los coeficientes de correlación Person fueron -0,594, -0,861, -0,761, -0,829, -0,645, -0,583, -0,676, -0,721, -0,740, 0,574, -0,652, -0,720 y -0,518, respectivamente. Las sustancias correspondientes fueron los principales ingredientes activos para la eliminación de radicales libres ABTS. La actividad antioxidante (valores IC50) determinada por dos métodos antioxidantes se correlacionó significativamente con los componentes conocidos ácido clorogénico, escutelarina B, ácido isoclorogénico B, escutelarina A y ácido clorogénico C, lo que indica que estos cinco componentes son las principales sustancias activas en la actividad antioxidante de la escutelarina.
El experimento utilizó 10 picos comunes correlacionados significativamente con DPPH y el contenido total de flavonoides como variables, y 13 picos comunes correlacionados significativamente con ABTS y el contenido total de flavonoides como variables para el análisis CA y PCA, respectivamente. Las muestras se dividieron en dos categorías, a saber, las silvestres S014 y S016, y los 14 lotes restantes de muestras plantadas. Se especula que puede estar relacionado con factores como el entorno de crecimiento (luz, altitud, latitud y longitud, etc.) y el periodo de recolección de las flores de linterna. Al mismo tiempo, se estableció un modelo de puntuación para la decocción estándar de Scutellaria baicalensis con estos componentes como variables. La clasificación de las puntuaciones para los 16 lotes de decocción estándar fue básicamente coherente con la clasificación de la actividad antioxidante in vitro. Basándose en el AC y el ACP, el autor llevó a cabo un análisis OPLS-DA e identificó cuatro componentes diferenciales principales relacionados con la eliminación de radicales libres DPPH: picos 11, 15 (escutelarina), 14 (ácido isoclorogénico B) y pico 13 (escutelarina); los cuatro componentes diferenciales principales relacionados con la eliminación de radicales libres ABTS son los picos 11, 15, 14 y pico 8 (escutelarina). Los resultados de la investigación sugieren que, a la hora de controlar la calidad de la Scutellaria baicalensis, además de controlar el alto contenido de Scutellaria baicalensis B (es decir, la baicalina), deberían añadirse adecuadamente otros indicadores de control de calidad con una fuerte actividad farmacológica.
En resumen, este estudio combina la huella química con la evaluación de la actividad biológica, y explora los ingredientes activos antioxidantes de la decocción estándar de Lampyridis a través de la investigación de correlación espectral. El método establecido es fácil de operar y los resultados son fiables, lo que puede proporcionar una base para futuras investigaciones sobre los efectos farmacológicos y la evaluación de la calidad de Lampyridis. En el futuro, se puede aumentar el tamaño de la muestra y utilizar la tecnología de cromatografía líquida-espectrometría de masas para identificar los picos comunes de componentes desconocidos en la decocción estándar, estudiar sus actividades farmacológicas e investigar exhaustivamente la relación espectro-efecto de múltiples actividades farmacológicas, proporcionando una base para la investigación de la calidad de Scutellaria baicalensis.