Espectros de huellas dactilares por HPLC y determinación del contenido de cuatro alcaloides en diferentes regiones del martillo de barra de hierro Fu Mao
Aconitum flavum Hand. - Mazz. pertenece al género Aconitum de la familia Ranunculaceae. También se conoce como Duanchongcao, Wuyao y Yizhihao, y es una hierba medicinal y popular tradicional china. Sus raíces y plántulas se utilizan como medicina, y sus raíces secas se conocen comúnmente como "martillo de varilla de hierro". La Medicina Herbal China de Shaanxi registra que el Martillo de Vara de Hierro de Fumao tiene los efectos de promover la circulación sanguínea, eliminar la estasis sanguínea, aliviar el dolor, disipar el viento y la humedad, reducir la hinchazón y las toxinas, detener las hemorragias, tratar las lesiones causadas por caídas, la artritis reumatoide y el dolor lumbar y de piernas.

Según los informes de la literatura, los alcaloides son los principales ingredientes activos de la hierba medicinal china Aconitum carmichaelii, y la aconitina es el principal componente químico con un contenido relativamente alto. Los principales componentes de la diferencia de contenido entre Fumao Iron Hammer y Iron Hammer son 12 epiaconitina y aconitina. Fumao Iron Hammer tiene un mayor contenido de 12 epiaconitina y aconitina que Iron Hammer. Estudios farmacológicos experimentales modernos han demostrado que la aconitina, la 12 epiaconitina, la sofocarpina y la 3-acetilaconitina tienen actividades analgésicas, antiinflamatorias y anticancerígenas.

En la actualidad, existen pocos informes sobre las normas de calidad del martillo de hierro de Fumao. El espectro de huellas dactilares de la medicina tradicional china se utiliza ampliamente para la evaluación de la calidad, que puede reflejar de forma exhaustiva los tipos y cantidades de componentes químicos contenidos en la medicina tradicional china. Por lo tanto, este estudio estableció cromatogramas de huellas dactilares HPLC para 15 lotes de diferentes orígenes de materiales medicinales Fumao Tiebang Hammer, y determinó el contenido de cuatro alcaloides, incluyendo 12 epiaconitina, Song Guoling, aconitina y 3-acetilaconitina; En segundo lugar, se utilizó el sistema de evaluación de similitud de huellas dactilares cromatográficas de medicina china (versión 2012A) para la evaluación de similitud, y el software SPSS para el análisis de conglomerados y el análisis de componentes principales, con el fin de proporcionar una base científica para el cribado de componentes indicadores y el control exhaustivo de la calidad de la medicina china Fumao Tiebang Hammer.

 

 

Determinación de las condiciones cromatográficas. La longitud de onda de absorción máxima de la 12 aconitina y el Song Guoling es de 210 nm, y la longitud de onda de absorción máxima de la aconitina y la 3-acetilaconitina es de 235 nm. Se investigaron 210, 215, 220 y 230nm para equilibrar los cuatro picos y lograr el mayor valor de respuesta. Finalmente, se seleccionó 215 nm como longitud de onda de detección. Se investigaron Agilent Eclipse Plus C18 (50 mm × 4,6 mm, 5 μ m), Unitary C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m), JADE-PAK ODS (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m) y ACE Excel C18PFP (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m). Comparando el factor de simetría, la resolución y la forma de los picos, elegimos finalmente la columna cromatográfica ACE Excel C18 PFP. Investigamos la adición de 2,0, 2,5 y 3,0 mL de trietilamina a la fase acuosa, y descubrimos que la adición de 2,5 mL de trietilamina producía mejores formas de pico cromatográficas y efectos de elución de gradiente. Por lo tanto, añadimos 2,5 mL de trietilamina a la fase acuosa. De acuerdo con la farmacopea y la bibliografía, se investigaron fases móviles como acetonitrilo: acetato de amonio 0,1%, acetonitrilo: ácido acético glacial 0,2% (ajustado a pH=6,2 con trietilamina), acetonitrilo y agua, y acetonitrilo: ácido fosfórico 0,1%. Finalmente, se seleccionó una elución en gradiente de acetonitrilo: solución acuosa de ácido fosfórico 0,1%, lo que dio como resultado una línea de base suave, una distribución uniforme de los picos y un buen efecto de separación.

Espectro de huellas dactilares y análisis de determinación del contenido. Existen diferencias en el número de picos cromatográficos, el tiempo de retención y el área del pico en el mismo tiempo de retención en el espectro de huella dactilar de las muestras de distintos orígenes del martillo de varilla de hierro Fu Mao; Los resultados de la evaluación de la similitud de los espectros de huella dactilar de 15 lotes de materiales medicinales oscilaron entre 0,769 y 0,952; El análisis de conglomerados clasificó las muestras S1 y S2 como Clase I; Las muestras S3~S5 se clasificaron como Clase II; S6~S13 se clasificaron como Clase III; S14 y S15 se clasificaron como Clase IV. Consistente con los resultados del análisis de componentes principales. El análisis de componentes principales se utilizó para filtrar componentes característicos comunes, identificar factores determinantes y proporcionar referencias para la evaluación de la calidad de los materiales medicinales de Fumao Iron Rod Hammer. El análisis de componentes principales utiliza valores propios superiores a 1,2 como criterio de extracción, y cuando la tasa de contribución de varianza acumulada es superior a 80%, se obtienen cinco componentes principales, que pueden representar la mayor parte de la información de los picos comunes en el espectro de la huella dactilar del martillo de varilla de hierro de Fu Mao. De acuerdo con los resultados de la determinación del contenido, se puede observar que los contenidos de 12 epiaconitina, Song Guoling y aconitina son relativamente altos, y las revisiones bibliográficas anteriores han encontrado que todos ellos tienen actividades antiinflamatorias y analgésicas. Sin embargo, el contenido de 3-acetilaconitina es generalmente bajo en varias muestras y no se utiliza como indicador de control de calidad del Martillo de Hierro de Fuzhong. Por lo tanto, basándose en los resultados de la determinación del contenido y el análisis de componentes principales, este experimento utilizó simultáneamente seis componentes característicos, a saber, 2, 3, 4 (12 epiaconitina), 5 (Song Guoling), 6 y 15 (aconitina), que contribuyen significativamente a los cinco componentes principales y tienen grandes áreas de pico. Entre ellos, los picos 2, 3 y 6 son desconocidos y pueden confirmarse más a fondo mediante espectrometría de masas para estudiar si pueden utilizarse como indicadores de control de calidad para la fase posterior del Fu Mao Iron Hammer.

Los resultados de la determinación del contenido indican que Yushu (S3), Jiuzhi (S4) y Maqin (S5), en la zona de producción de Qinghai, tienen mayor contenido de alcaloides; Wang Rong et al. determinaron el contenido de alcaloides del martillo de hierro de Fumao en Guoluo, Yushu, Haidong y Guyuan, Ningxia. Los resultados mostraron que el contenido de alcaloides era mayor en el martillo de hierro de Fumao en Guoluo Banma y Yushu, lo que coincide con los resultados de este estudio. La cantidad total de aconitina es la más alta entre los cuatro componentes, mientras que la cantidad total de 3-acetilaconitina es la más baja, lo que coincide con los resultados de la investigación de Zhao Meiyu. Las zonas de producción con mayor contenido de 12 aconitina, Song Guoling, aconitina y 3-acetilaconitina son la Granja Forestal de Jiangxi en Yushu, Qinghai, el Aeropuerto de Maqin en Qinghai, Aba en Sichuan y Guinan en Qinghai; la cantidad total de cuatro alcaloides en las muestras de la Granja Forestal de Jiangxi y el Aeropuerto de Maqin también fue la más alta. Existen diferencias en la calidad de los materiales medicinales como Fu Mao Tie Ban Hammer en diferentes regiones, lo que puede deberse a factores como el entorno de crecimiento, el clima, el suelo, el tiempo de recolección y los años de crecimiento de los materiales medicinales, que afectan a la acumulación de metabolitos secundarios en los materiales medicinales, dando lugar a diferencias en la similitud y el contenido de los materiales medicinales.

La farmacopea china no contempla el control de calidad por HPLC de la hierba medicinal Fu Mao Tie Ban Zhong. Por lo tanto, en este estudio, se utilizó el método HPLC-DAD para establecer el espectro de huellas dactilares de Fu Mao Tie Ban Zhong, y se determinó el contenido de cuatro componentes alcaloides. Al mismo tiempo, se utilizaron la evaluación de la similitud, el análisis de conglomerados y el análisis de componentes principales para evaluar exhaustivamente la calidad del Fu Mao Tie Ban Zhong de diferentes orígenes. Los tres métodos se verificaron y complementaron mutuamente, evitando la desventaja de evaluar la calidad de las hierbas medicinales basándose en el contenido de un solo componente, y proporcionando una referencia para la evaluación de la calidad de las hierbas medicinales Fu Mao Tie Ban Zhong.