Estudio sobre las diferencias de calidad entre la Fritillaria de Zhejiang y la Fritillaria de Hubei basado en la huella dactilar HPLC-ELSD y la cuantificación de componentes múltiples
La Fritillaria thunbergii Miq., un bulbo seco de la planta de la familia de las liliáceas Fritillaria thunbergii Miq., figura como el primero de los "Ocho sabores de Zhejiang" y se ha incluido en varias ediciones de la Farmacopea de la República Popular China (en lo sucesivo, la "Farmacopea China"). Se recolecta, se lava, se humedece, se corta en rodajas gruesas y se seca cuando la planta se marchita a principios de verano; Xi la llamó "Zhe Bei Pian". La Fritillaria de Zhejiang tiene las funciones de despejar el calor, resolver la flema, aliviar la tos, desintoxicar y dispersar los nódulos y eliminar los carbuncos. Se utiliza clínicamente para tratar el calor del viento, la tos con flema, los abscesos pulmonares, los abscesos mamarios y las úlceras.

La fritillaria de Hubei es un bulbo seco de Fritillaria hupehensis Hsiao et K.C. Hsiao, una planta de la familia de las liliáceas. Sus principales funciones son eliminar el calor y la flema, aliviar la tos y dispersar los nódulos. Se utiliza habitualmente en la práctica clínica para tratar síntomas como la tos con calor pulmonar y la tos con flema. Tanto la Fritillaria de Zhejiang como la de Hubei pertenecen al género Fritillaria y pueden utilizarse como medicina tradicional china con fines medicinales; los ingredientes activos de ambas son alcaloides, pero sus tipos son diferentes. Los principales ingredientes activos de la Fritillaria de Zhejiang incluyen Fritillaria A, Fritillaria B, IsoFritillaria A, etc. Los principales ingredientes activos de la Fritillaria de Hubei incluyen Fritillaria A, Fritillaria B, Hubeijia, Hubeiyi, Hubeixin, etc. Por lo tanto, existen ciertas diferencias en los efectos farmacológicos entre la Fritillaria de Zhejiang y la Fritillaria de Hubei. En la Farmacopea China de 2020, en la categoría de hierbas medicinales, la Fritillaria de Zhejiang y la Fritillaria de Hubei se enumeraron por separado, lo que indica que existen ciertas diferencias entre las dos hierbas medicinales.

Debido a la gran variedad y diferencia de precios de las especies de Fritillaria en el mercado, se produce un fenómeno de sustitución mutua o de sustitución de Fritillaria falsa y Fritillaria de Hubei. Debido a las limitaciones en la identificación morfológica, microscópica y fisicoquímica, no es posible demostrar eficazmente las similitudes y diferencias en la calidad de ambos materiales medicinales. Por lo tanto, es necesario establecer un método más específico y preciso para distinguir y diferenciar eficazmente entre ambos.

La edición 2020 de la Farmacopea China especifica que los indicadores de determinación del contenido de Fritillaria thunbergii son Fritillaria A y Fritillaria B, mientras que el indicador de determinación del contenido de Fritillaria thunbergii en la provincia de Hubei selecciona Fritillaria B, y el límite de contenido de Fritillaria thunbergii B en la provincia de Hubei es significativamente superior al límite total de Fritillaria thunbergii A y Fritillaria thunbergii B en la provincia de Zhejiang, lo que proporciona condiciones objetivas para la adulteración y el uso de Fritillaria thunbergii. Ante el complejo sistema de composición química de la medicina tradicional china, el uso de un único modelo cuantitativo ya no es suficiente para satisfacer las necesidades de control de calidad de la medicina china moderna. En la actualidad, existen pocos informes sobre la diferencia en el contenido de principios activos entre los dos tipos de Fritillaria. Por lo tanto, en este estudio, se utilizó el método HPLC-ELSD para establecer espectros de huellas dactilares de Fritillariae Thunbergii Bulbus (FTB) y Fritillariae Hupehensis Bulbus (FHB) en Fritillariae thunbergii y Fritillariae Hupehensis Bulbus en Hubei, respectivamente. Al mismo tiempo, se determinaron cinco componentes alcaloides idénticos y se llevó a cabo un estudio comparativo exhaustivo de Fritillariae thunbergii y Hubei, tanto desde el punto de vista cualitativo como cuantitativo, que sirvió de referencia para la identificación y evaluación de la calidad de ambos materiales medicinales.

 

En el establecimiento y la aplicación de espectros de huellas dactilares, se establecieron espectros de huellas dactilares HPLC-ELSD de Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii basándose en las características de los componentes alcaloides de Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii. Los resultados de la evaluación de la similitud mostraron que los espectros de huellas dactilares de la misma Fritillaria thunbergii eran muy similares. Por lo tanto, los espectros de huellas dactilares pueden utilizarse como características comunes para la investigación del control de calidad de Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii. Al comparar las diferencias entre los espectros de huella dactilar de los dos tipos de Fritillaria, se puede observar que el espectro de huella dactilar de la Fritillaria thunbergii carece claramente del pico del espectro del pigmento Hubeijia o que el contenido de pigmento Hubeijia es extremadamente bajo, lo que dificulta su detección en la Fritillaria thunbergii. Por lo tanto, la Hubeijia puede servir como biomarcador diferencial para distinguir y diferenciar entre dos tipos de Fritillaria, la Fritillaria de Zhejiang y la Fritillaria de Hubei.

Utilizando el área del pico común como variable, se realizaron análisis HCA, PCA y OPLS-DA por separado. Los resultados de HCA y PCA fueron capaces de distinguir y diferenciar eficazmente entre Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii, lo que indica que la combinación de huella dactilar, HCA o PCA es un método eficaz para identificar Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii. Para aclarar aún más las diferencias en la composición química entre los dos tipos de Fritillaria thunbergii, se utilizó el análisis OPLS-DA para identificar cuatro biomarcadores diferenciales. Según la importancia de las diferencias, se ordenaron como Fritillaria thunbergii>Pico 4>Berberina A>Berberina B, lo que indica que existen diferencias significativas en el contenido de los componentes mencionados entre los dos tipos de Fritillaria thunbergii. Esta diferencia se debe en parte a las diferencias en los propios materiales medicinales. Los diferentes orígenes también pueden estar estrechamente relacionados con factores como el entorno de plantación y el ciclo de crecimiento de las hierbas medicinales.

En cuanto a la selección de los indicadores de determinación del contenido, los alcaloides contenidos en Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii se dividen principalmente en alcaloides esteroides y alcaloides esteroides. La investigación ha descubierto que los alcaloides tienen diversas actividades farmacológicas como expectorante, supresor de la tos, alivio del asma, efectos antiinflamatorios y antitumorales, que concuerdan con las indicaciones funcionales de la Fritillaria de Zhejiang y la Fritillaria de Hubei. Se identificaron cinco alcaloides idénticos a partir de los espectros de huellas dactilares HPLC-ELSD de Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii. Los resultados de la determinación del contenido mostraron que, salvo la diferencia de contenido del ibuprofeno, los otros cuatro componentes de la Fritillaria thunbergii, la Berberina A, la Berberina B y la IsoBerberina A presentaban diferencias significativas de contenido. Entre ellos, el contenido de Berberina A en Fritillaria thunbergii fue significativamente mayor que el de Fritillaria thunbergii, mientras que el contenido de Berberina A, Berberina B e IsoBerberina A fue significativamente menor que el de Fritillaria thunbergii. Por lo tanto, midiendo el contenido de Berberina A, Berberina A, Berberina B, e IsoBerberina A, es posible distinguir entre Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii. Los resultados de la investigación obtenidos son básicamente coherentes con los resultados del análisis OPLS-DA. Existen informes en la literatura que indican que las diferencias en el contenido y la proporción de alcaloides pueden ser un factor importante que conduce a las diferencias en los efectos contra la tos, la flema, antibacterianos y antiinflamatorios entre los dos tipos de Fritillaria thunbergii. La determinación simultánea de múltiples alcaloides es de gran importancia para el control de calidad y la evaluación de las medicinas tradicionales chinas de orientación clínica, Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii. Por lo tanto, se recomienda aumentar la determinación de berberina e isoberberina en el control de calidad de los materiales medicinales de Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii.

En resumen, este estudio estableció métodos de huella digital HPLC-ELSD para Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii, y determinó simultáneamente el contenido de cinco alcaloides, que pueden proporcionar referencias importantes para la identificación y el control de calidad de los materiales medicinales de Fritillaria thunbergii y Fritillaria thunbergii.