Estudio comparativo sobre los espectros característicos de UPLC y los contenidos de componentes multiíndice de diferentes especificaciones de materiales medicinales de Qingpi.
Qingpi se registró por primera vez en el libro "Saco de perlas". Li Shizhen dijo: "La cáscara de Qingju era inútil en la antigüedad, pero no fue hasta la Dinastía Song cuando los expertos médicos empezaron a utilizarla". No fue hasta la dinastía Song cuando se compararon la cáscara de naranja inmadura y la madura y se descubrió que tenían efectos medicinales ligeramente diferentes, de ahí la distinción entre cáscara de Qingju y cáscara de Huangju. Qingpi se refiere a la piel seca o inmadura del fruto de Citrus reticulata Blanco y sus variedades cultivadas de la familia Rutaceae. Hay dos especificaciones diferentes para el Qingpi utilizado en medicina: recolectar los frutos jóvenes que caen del suelo entre mayo y junio, secarlos al sol, y comúnmente conocidos como "Geqingpi"; recolectar los frutos inmaduros entre julio y agosto, cortarlos longitudinalmente en cuatro pétalos desde la piel hasta la base, retirar todos los pétalos y secarlos al sol, comúnmente conocidos como "Piel Verde de Cuatro Flores". La piel verde es de naturaleza cálida, con un sabor amargo y acre. Favorece los meridianos del hígado, la vesícula biliar y el estómago. Tiene los efectos de calmar el hígado y descomponer el qi, reduciendo la acumulación y resolviendo el estancamiento. Se utiliza para el dolor de pecho y costillas, dolor de hernia, fetidez mamaria, absceso mamario, acumulación de alimentos y estancamiento del qi, y distensión y dolor abdominal. Los principales componentes del Qingpi son aceites volátiles, flavonoides, aminoácidos, etc. Estudios farmacológicos modernos han demostrado que el Qingpi tiene los efectos de regular el tracto gastrointestinal, promover el flujo biliar, efectos antiarrítmicos, efectos expectorantes y tratar la mastitis. Las dos especificaciones de piel verde tienen indicaciones funcionales ligeramente diferentes. Un tipo de piel verde se centra principalmente en romper el estancamiento del qi, mientras que el otro tipo se centra en regular el hígado y regular el qi.
Además, las dos también presentan ligeras diferencias en su composición. La edición 2020 de la Farmacopea China ha hecho diferentes regulaciones sobre las características y la identificación de las diferentes especificaciones de la cáscara verde, y los elementos de determinación del contenido sólo tienen requisitos límite para la hesperidina. Los resultados de la investigación de Li et al. mostraron que el contenido de hesperidina y sinomenina en Geqingpi era superior al de Sihuaqingpi, mientras que el contenido de N-metilamina y aceite volátil era inferior. La tendencia del contenido alto y bajo de los cuatro componentes en dos especificaciones de diferentes regiones era básicamente la misma. Zhao et al. utilizaron GC-MS para analizar los aceites volátiles de Eucommia ulmoides y Eucommia ulmoides, y descubrieron que nueve compuestos, incluidos geraniol, nerolidol y α - isoterpineno, eran exclusivos de Eucommia ulmoides. Los componentes principales, limoneno y linalol, eran más del doble que los de Eucommia ulmoides, mientras que el contenido de otros componentes variaba mucho. Yi et al. también señalaron que existen ciertas diferencias en la composición de Geqingpi y Sihuaqingpi utilizando cromatografía de gases y cromatografía líquida para estudiar sus componentes. Todos los estudios anteriores indican que existen diferencias en la composición química entre el Geqingpi y el Sihuaqingpi.
Este estudio estableció espectros característicos de cromatografía líquida de ultra alto rendimiento (UPLC) de Qingpi y Sihua Qingpi, combinados con métodos quimiométricos, para comparar las diferencias entre las dos especificaciones de Qingpi y comparar el contenido de cinco ingredientes efectivos en las dos especificaciones de materiales medicinales de Qingpi, proporcionando referencia para mejorar los estándares de cantidad de Qingpi en las dos especificaciones.

 

Preparación de la solución de ensayo. En este estudio se utilizó el análisis de factor único para evaluar los efectos de los disolventes de extracción (metanol, metanol 70%, metanol 50%, etanol, etanol 70%, etanol 50%), los métodos de extracción (extracción ultrasónica, reflujo de calentamiento) y los tiempos de extracción (15, 30, 45 minutos) sobre los espectros característicos y la determinación del contenido de cada componente, con el pico cromatográfico "área total del pico/tamaño de la muestra" y los contenidos de sinomenina, hesperidina, naringina y hesperidina como indicadores de evaluación. Los resultados mostraron que el calentamiento a reflujo con metanol 70% durante 30 minutos tuvo el mejor efecto.
Establecimiento y análisis de mapas de características. Los resultados del estudio de los mapas de características mostraron que había 7 picos comunes en los mapas de características de UPLC tanto del Geqingpi como del Sihuaqingpi. Se identificaron cinco componentes característicos de Geqingpi y Sihuaqingpi mediante estándares de referencia, a saber, sinomenina, naringina, hesperidina, naringina y hesperidina. Se investigaron diferentes fases acuosas (ácido fosfórico 0,1% y ácido fórmico 0,1%), dos tipos diferentes de columnas cromatográficas Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μ m), YMC Triart C18 (100 mm × 2,1 mm, 1.9 μ m), y se compararon los efectos de diferentes longitudes de onda de detección (275 nm y 284 nm), temperaturas de columna (38, 40, 42 ℃), y caudales (0,28, 0,30, 0,32 mL/min) en los picos cromatográficos de Qingpi espectros característicos. Los resultados mostraron que el uso de Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μ m) columna cromatográfica con 0,1% ácido fórmico como la fase acuosa, en las condiciones cromatográficas de 275 nm de longitud de onda de detección, la temperatura de la columna de 40 ℃, y el caudal de 0,30 mL/min, los picos cromatográficos se obtuvieron. El grado de separación es bueno, la línea de base es estable, el número de picos cromatográficos es alto, y la señal es correspondientemente alta.
La diferencia en la composición química entre Geqingpi y Sihuaqingpi. Los espectros característicos UPLC de diferentes especificaciones de materiales medicinales Qingpi establecidos en este estudio identificaron 7 picos comunes tanto en Geqingpi como en Sihuaqingpi, de los cuales se identificaron 5 picos característicos. Se determinó que el pico 1 era sinomenina; el pico 3 es glucósido de cáscara de pomelo Yunxiang; el pico 4 es hesperidina; el pico 6 es extracto de Chenpi; el pico 7 es extracto de cáscara de naranja. En este estudio, se utilizaron HCA, PCA y OPLS-DA para clasificar las diferentes especificaciones de los materiales medicinales de cáscara verde en dos categorías; un análisis más detallado revela que los componentes químicos representados por los picos 1, 4 y 2 son los componentes diferenciales entre estas dos especificaciones de hierbas medicinales Qingpi. Por lo tanto, estos tres componentes se pueden utilizar como puntos de entrada para análisis posteriores para distinguir entre estas dos especificaciones de hierbas medicinales Qingpi.
Los flavonoides son los principales ingredientes activos del Qingpi. Los resultados de la determinación del contenido de cinco flavonoides conocidos en Geqingpi y Sihuaqingpi mostraron que el contenido de sinomenina y hesperidina en Geqingpi era superior al de Sihuaqingpi, mientras que el contenido de naringina y hesperidina en Geqingpi era inferior al de Sihuaqingpi. En general, el contenido de naringina en las dos especificaciones de Qingpi Yunxiangyupi era relativamente similar. El análisis de la prueba t de muestras independientes mostró que las diferencias en sinomenina, hesperidina y naringina eran estadísticamente significativas. Además de los flavonoides estudiados en este experimento, el aceite volátil también es uno de los componentes eficaces de las hierbas medicinales Qingpi. La investigación de Zhao sobre los aceites volátiles de Geqingpi y Sihuaqingpi mostró que nueve compuestos, incluyendo geraniol, nerolidol y α - isoterpineno, son exclusivos de Geqingpi. Los componentes principales, limoneno y linalool, son más del doble que los del Sihuaqingpi. En la aplicación clínica, las indicaciones funcionales de la Piel Verde de Cuatro Flores son más leves que las de la Piel de Geqing, lo que puede estar relacionado con el menor contenido de ingredientes activos como la hesperidina y la sinomenina, así como de aceite volátil en la Piel Verde de Cuatro Flores en comparación con la Piel de Geqing. Según la bibliografía pertinente, el Geqingpi es un fruto joven que se recolecta de mayo a junio; la Piel Verde de Cuatro Flores se recolecta de frutos inmaduros entre julio y agosto, y la diferencia entre ambos radica en el momento de la recolección y la fase de madurez. De los resultados anteriores se desprende que las diferentes etapas de crecimiento y desarrollo pueden afectar a la acumulación de principios activos en el Qingpi. Sin embargo, durante el periodo reproductivo y de desarrollo, los ingredientes activos del Qingpi no muestran simplemente una tendencia creciente o decreciente, sino que se produce un cierto aumento y una cierta disminución: El extracto de chenpi y la hesperidina muestran una tendencia creciente; la simulina, la hesperidina y la naringina mostraron una tendencia decreciente. Si las diferencias en estos contenidos conducen directa o indirectamente a diferentes focos de eficacia de las distintas especificaciones de Qingpi requiere más experimentos farmacológicos para probarlo. Sobre la base de la diferencia en el contenido de los cinco ingredientes activos en dos especificaciones diferentes de Qingpi, combinado con el diferente énfasis de los dos efectos, podemos aplicar mejor la diferenciación y el tratamiento del síndrome de la medicina tradicional china, y mejorar la eficacia del tratamiento si la prescripción se etiqueta por separado para su uso en aplicaciones clínicas. Mientras tanto, si las normas de farmacopea actuales pueden establecer normas de calidad separadas para Geqingpi y Sihuaqingpi, puede ser más propicio para el control de calidad de los materiales medicinales Qingpi.