Establecimiento de un mapa de huellas dactilares de clasificación de proteínas y estudio molecular sobre la identificación del origen de los materiales medicinales de Bombyx mori
Bombyx Batryticatus es un subproducto formado por la infección (o inoculación artificial) de Beauveria bassiana (Bals.) Vuillart en larvas de gusanos de seda durante la cría, que les provoca la muerte. Tiene los efectos de aliviar el viento y los espasmos, disipar el viento y el dolor, y resolver la flema y los nódulos. Debido a la implantación en China de la disposición industrial de "trasladar la morera del este al oeste", Sichuan y Yunnan se han convertido en las principales provincias en la industria sericícola, y por lo tanto se han convertido en las principales zonas de producción de materiales medicinales para gusanos de seda. Debido al hecho de que los gusanos de seda producidos en Sichuan tienen mejores características morfológicas que los producidos en Yunnan, que se ajustan a las normas de los gusanos de seda de alta calidad de "cuerpo recto y regordete, textura firme, color blanco y sección transversal brillante", tal como se describen en anteriores libros de hierbas y farmacopeas chinas de las ediciones 63ª y 77ª, su reconocimiento en el mercado es mayor y sus precios de venta también son más elevados. En estudios de mercado, se ha descubierto que los comerciantes suelen confundir intencionadamente el origen de ambos productos para obtener beneficios en sus ventas. Para mejorar la seguridad y la eficacia de los medicamentos clínicos, es necesario investigar el método de identificación del origen de los gusanos de seda.

Como es bien sabido, la formación y acumulación de ingredientes eficaces en los materiales medicinales chinos están estrechamente relacionadas con sus condiciones naturales de crecimiento. Por lo tanto, el origen es uno de los factores importantes que afectan a la calidad de los materiales medicinales chinos. El establecimiento de métodos de identificación y trazabilidad del origen desempeña un papel importante para satisfacer las necesidades de los consumidores de comprender la información sobre el producto, proteger los derechos e intereses de las empresas de producción, procesamiento y venta, y mejorar la competitividad de los materiales medicinales chinos en el mercado internacional. Liao Baosheng y otros propusieron que la identificación del origen y la trazabilidad de los materiales medicinales chinos pueden llevarse a cabo basándose en la tecnología de la biología molecular, la tecnología de las huellas dactilares de la medicina tradicional china, la tecnología del rastreo isotópico, la tecnología de la trazabilidad de la identificación inalámbrica por radiofrecuencia y la tecnología de los códigos de barras. La electroforesis de proteínas es un método estándar de identificación de variedades adoptado por la Asociación Internacional de Inspección de Semillas, pero este método sigue teniendo las desventajas de su baja resolución y la dificultad para la identificación intraespecífica, lo que dificulta su uso para la identificación del origen y la trazabilidad de los materiales medicinales tradicionales chinos. En vista de ello, este artículo se propone explorar la viabilidad de combinar las técnicas de precipitación jerárquica y electroforesis de proteínas para establecer una tecnología de huellas dactilares jerárquicas, con el fin de analizar las diferencias en el proteoma de los gusanos de seda de Yunnan y Sichuan, identificar las moléculas diferenciales obtenidas y realizar análisis bioinformáticos para explorar las moléculas relevantes para la identificación del origen, proporcionando una base experimental para establecer un método de identificación del origen sencillo, viable y científicamente preciso.

En este artículo se extrajeron proteínas solubles en ácido, solubles en álcali, solubles en agua y solubles en alcohol de gusanos de seda de Yunnan y Sichuan, y se estudiaron sus espectros de proteína total y de huella dactilar graduada. Los resultados mostraron que los espectros de la huella dactilar de la proteína total de los dos gusanos de seda eran muy similares, lo que dificulta su uso para la identificación del origen; Hay una diferencia significativa en los espectros de la huella dactilar de clasificación entre las dos especies de gusanos de seda, que se espera que se utilice para la identificación del origen; La riqueza de la información proporcionada por el espectro de la huella dactilar jerárquica está en el orden de proteínas solubles en alcohol>proteínas solubles en ácido>proteínas solubles en agua>proteínas solubles en álcali. A partir de las diferencias en los mapas de huellas dactilares jerárquicas, se descubrieron un total de 273 moléculas proteicas características, entre las que se incluyen proteínas β - glucosidasa, antiquimotripsina, antitripsina y de dominio lipasa. Estas moléculas tienen actividades como transferasa, catalasa y tiorredoxina peroxidasa, y participan en diversos procesos celulares, procesos metabólicos, respuesta a estímulos, regulación biológica y procesos de desarrollo. Implican vías como la síntesis de metabolitos secundarios, el metabolismo microbiano en distintos entornos, la biosíntesis de antibióticos y los mecanismos de defensa biológica, lo que refleja la importante influencia de distintos factores del hábitat en la interacción entre los gusanos de seda y Beauveria bassiana y en la formación de Beauveria bassiana. Tienen valor potencial para identificar el origen de Beauveria bassiana.
Las hierbas medicinales auténticas son un criterio integral único para controlar la calidad de las hierbas medicinales en la medicina tradicional china, que refleja profundamente la estrecha relación entre la calidad de las hierbas medicinales chinas y su lugar de origen. El establecimiento de un método científico para la identificación del origen puede proporcionar un importante apoyo técnico para la supervisión del mercado de las hierbas medicinales chinas. Yang Jian, Zhang Hongkun, Song Jun y otros realizaron estudios de identificación del origen de Dendrobium officinale, Anemarrhena chinensis y Auricularia auricula basándose en isótopos estables, huellas dactilares de elementos minerales y códigos de barras de ADN, respectivamente. Los estudios de farmacognosia molecular han demostrado que la influencia del lugar de origen en la calidad de la medicina tradicional china se consigue mediante cambios en factores del hábitat como la temperatura, la humedad y la luz, que afectan a la expresión de genes relacionados. Las proteínas son productos de la expresión génica, y los cambios en los factores del hábitat afectan inevitablemente a sus tipos de expresión y a su abundancia. Por lo tanto, merece la pena prestar atención a sus perspectivas de aplicación en la identificación del origen. Los resultados de este estudio indican que los diferentes factores de hábitat en Yunnan y Sichuan tienen un impacto significativo en la expresión proteica de los gusanos de seda producidos en las dos regiones, y las diferencias correspondientes pueden detectarse utilizando la huella digital jerárquica. En comparación con el SDS-PAGE y la electroforesis bidimensional en gel, la tecnología de huella jerárquica trata primero las muestras con acetona para clasificarlas según su hidrofobicidad, y luego compara muestras similares en el mismo gel. Tiene las ventajas de un funcionamiento sencillo, alta resolución, resultados precisos y alta reproducibilidad, lo que proporciona una referencia para la identificación del origen de otros materiales medicinales chinos. Además, no hay moléculas significativamente abundantes en las proteínas solubles en alcohol de Bombyx mori. Al construir una huella dactilar jerárquica, puede evitar la interferencia mutua y la cobertura entre bandas, proporcionando una información más rica de la huella dactilar y una mejor resolución que otros tipos de proteínas. Los resultados anteriores también aportan ideas para la selección de moléculas relacionadas con la identificación del origen de otros materiales medicinales chinos.