Estudio sobre la evaluación de la calidad de Bombyx mori mediante el reconocimiento químico de patrones combinado con la huella dactilar por HPLC
Bombyx mori es uno de los medicamentos para animales más utilizados en la práctica clínica, sobre todo para tratar enfermedades como la flema hepática, las convulsiones, el sobresalto infantil, el tétanos, etc. Su fuente es el cuerpo desecado de las larvas de 4º a 5º estadio del gusano de seda Bombyx mori Linnaeus, que fueron infectadas con Beauveria bassiana (Bals.) Vuillart y murieron. Los estudios químicos han demostrado que sus principales principios activos son proteínas, aminoácidos, flavonoides y otros componentes. Los estudios farmacológicos modernos han demostrado que el extracto rico en proteínas de Bombyx mori tiene efectos antiepilépticos, inmunomoduladores e inhibidores del crecimiento tumoral de ratones portadores del tumor G7, promueve la recuperación del deterioro motor inducido por MPTP en ratones con enfermedad de Parkinson, previene el agotamiento de la dopamina, etc.
Como gusano de seda con una única dieta, su característica de alimentarse únicamente de hojas de morera determina la rica y diversa absorción, transformación y metabolismo de los principales flavonoides de las hojas de morera en su organismo. Las investigaciones han demostrado que, tras la infección por Fusarium oxysporum, los flavonoides de los gusanos de seda sufren una biotransformación. Por ejemplo, flavonoides como la quercetina y el kaempferol se convierten en quercetina-7-O - β - D-4-O-metilglucósido y kaempferol-7-O - β - D-4-O-metilglucósido a través de la reacción de 4-O-metilglucosilación. Xing et al. descubrieron que a medida que aumenta el tiempo de muerte, el contenido y la transformación de los flavonoides en el cuerpo también difieren, y especularon que la quercetina 7-O - β - D-4-O-metilglucósido y el kaempferol-7-O - β - D-4-O-metilglucósido pueden utilizarse como uno de sus indicadores de control de calidad. Por lo tanto, los flavonoides pueden servir como indicadores importantes para evaluar la calidad de los gusanos de seda.

La combinación del espectro de huellas dactilares y el reconocimiento de patrones químicos es un método eficaz para evaluar la calidad de la medicina tradicional china, que se ha utilizado ampliamente en la evaluación de la calidad de la medicina tradicional china, las piezas de decocción de medicina china, los gránulos de fórmula, etc. En la actualidad, existen varios estudios sobre los espectros de huellas dactilares relacionados con los gusanos de seda, incluyendo la huella dactilar ultravioleta, la huella dactilar infrarroja, HPLC, HPCE y espectros de huellas dactilares de proteínas. Las categorías de composición abarcan componentes solubles en agua, componentes solubles en lípidos, componentes solubles en alcohol, etc. Sin embargo, existen problemas de escasa eficacia de separación y picos de identificación limitados, lo que dificulta la caracterización de sus características de calidad. Los investigadores han demostrado que los gusanos de seda producidos en Sichuan tienen mejor calidad y niveles más altos de Beauveria bassiana en comparación con otras regiones como Guangxi, Yunnan y Zhejiang. Aunque ha habido algunos informes de investigación sobre la composición química y el control de calidad de Bombyx mori, actualmente no existe un buen método de control de calidad debido a su compleja composición y bajo contenido. Por lo tanto, este estudio utilizó cromatografía líquida de alto rendimiento para establecer espectros de huellas dactilares de 20 lotes de materiales medicinales de gusanos de seda de diferentes orígenes, y llevó a cabo una investigación de diferenciación mediante la combinación de modos de identificación química como el análisis de similitud, el análisis de conglomerados y el análisis de componentes principales. En referencia a los requisitos del artículo del gusano de seda en la edición 2020 de la Farmacopea China, se determinaron el contenido de humedad, el contenido total de cenizas, el contenido de cenizas insolubles en ácido y el extracto. El contenido del ingrediente efectivo Beauveria bassiana se determinó utilizando el método anterior del grupo de investigación, con el objetivo de evaluar exhaustivamente la calidad de los materiales medicinales de diferentes orígenes, proporcionar una base científica para el control de calidad y la mejora estándar de los materiales medicinales del gusano de seda, y proporcionar una referencia para la investigación de otros materiales medicinales.

En este experimento se investigaron las condiciones de pretratamiento, como el método de extracción, el disolvente de extracción y el tiempo de extracción, y se determinó que el método de extracción (extracción por reflujo, extracción por ultrasonidos) era óptimo para la extracción por ultrasonidos, el disolvente de extracción (metanol, metanol 80%, acetonitrilo y agua) era óptimo para el metanol 80%, y el tiempo de extracción (15, 30, 45 minutos) era óptimo para 30 minutos. La huella digital establecida del gusano de seda tiene una similitud entre 0,92 y 0,99, que es relativamente alta y proporciona una base para la evaluación de la calidad del gusano de seda.
El espectro de huellas dactilares establecido por nuestro instituto de investigación se centra principalmente en los flavonoides de los materiales medicinales de Bombyx mori. Wang et al. utilizaron técnicas de farmacología de red y acoplamiento molecular para estudiar los resultados, que mostraron que la quercetina, el kaempferol y otros componentes pueden ser los principales componentes de base material de la capacidad de Bombyx mori para aliviar el viento y los espasmos. Múltiples estudios también han demostrado que la quercetina y el kaempferol son uno de los principales ingredientes activos en el tratamiento de la epilepsia. Como hierba clave para aliviar el viento y los espasmos, una de las sustancias base de la acción de Bombyx mori pueden ser los flavonoides. Además, este estudio también realizó un análisis de correlación entre las áreas de pico de cada pico común y las características, los extractos, el contenido total de cenizas y el contenido de muscardina blanca de los materiales medicinales. Los resultados mostraron que las características transversales estaban positivamente correlacionadas con las características superficiales, la longitud del material medicinal y el contenido de moscardina blanca, y positivamente correlacionadas con las áreas de pico de los picos 1, 2, 3, 4, 6 y 7. Tras la comparación, los picos 1, 2, 4, 6 y 7 se identificaron como rutina, hiperósido, astragalósido, quercetina y kaempferol, que son los principales flavonoides de las hojas de morera. Esto indica que la transformación de los flavonoides durante la formación de los gusanos de seda está relacionada con el "cuerpo vítreo" de la sección transversal. Existe una fuerte correlación entre la calidad de las hierbas medicinales y la formación, lo que también confirma el punto característico de la calidad de "el color blanco, las rayas rectas y las secciones transversales negras y brillantes son las preferidas para los gusanos de seda" desde la antigüedad.

En resumen, el espectro de huellas dactilares establecido en este artículo no sólo incluye los posibles componentes de la base material del efecto farmacológico del "Xifeng Zhijing" del gusano de seda, sino que también tiene una cierta correlación con los indicadores de calidad del propio material medicinal del gusano de seda, lo que puede reflejar de forma exhaustiva la calidad del material medicinal del gusano de seda y proporcionar una base científica para el control de calidad del material medicinal del gusano de seda. En las normas de control de calidad de los materiales medicinales de Cordyceps sinensis, debe considerarse plenamente que se trata de un complejo de "hoja de insecto bacteriano", y deben utilizarse múltiples indicadores para evaluar exhaustivamente su calidad, estableciendo una norma de calidad más científica y razonable para los materiales medicinales.