Cribado rápido de principios activos hipolipemiantes en ruibarbo mediante materiales biocompatibles de membrana de células hepáticas L02 modificadas químicamente
El cribado de principios activos en la medicina tradicional china se basa principalmente en el seguimiento de la actividad, con componentes monoméricos como objetos de cribado, que tiene las desventajas de una gran carga de trabajo, una operación engorrosa y una baja eficiencia. En comparación con los métodos tradicionales de seguimiento de actividad, la cromatografía de membrana celular (CMC) es una técnica de cromatografía de afinidad biológica de rápido desarrollo en los últimos años, que tiene las características de reconocimiento específico y separación eficiente. El principio básico de la CMC es unir la membrana celular a la superficie de un soporte de gel de sílice para formar una fase estacionaria. El receptor de la membrana celular puede unirse específicamente a las moléculas de fármaco, y la interacción entre las moléculas de fármaco y los receptores de la membrana celular puede estudiarse mediante análisis cromatográfico. El CMC combina las ventajas de la tecnología cromatográfica, la biología celular y molecular y la farmacología de receptores para lograr una simulación aproximadamente dinámica del proceso de acción de los principios activos farmacéuticos in vivo dentro de la columna cromatográfica; en comparación con los adsorbentes utilizados habitualmente, como las resinas de intercambio iónico y las resinas de adsorción macroporosas, el CMC tiene la ventaja de combinar la separación cromatográfica con el cribado de actividad. Es fácil de manejar, rápido y estable, y tiene una alta sensibilidad, por lo que es especialmente adecuado para el cribado de principios activos en sistemas complejos como la medicina tradicional china.
Cuando se prepara la cromatografía de membrana celular, puede dividirse en adsorción física y modificación química en función de las diferentes formas de unión de la membrana celular y el soporte de gel de sílice. La cromatografía de afinidad biológica de membrana celular por adsorción física se prepara utilizando el efecto de fusión de la propia membrana celular y el efecto de adsorción de los grupos hidroxilo del silicio en la superficie del gel de sílice; este tipo de fuerza es relativamente débil, lo que hace que la membrana celular se desprenda fácilmente del soporte, dando lugar a una corta vida útil de la columna cromatográfica. La modificación química de la membrana celular para la cromatografía de afinidad biológica implica la unión covalente entre el gel de sílice y la membrana celular; El grupo silanol del gel de sílice sufre una reacción de condensación con el agente de acoplamiento silano para introducir grupos amino, que se entrecruzan con moléculas de glutaraldehído. Un extremo del grupo funcional aldehído libre puede obtenerse en la superficie del gel de sílice; La membrana celular contiene un gran número de grupos amino, que son propensos a sufrir reacciones de condensación de aldoaminas a temperatura ambiente, con lo que se consigue la conexión covalente entre el gel de sílice y la membrana celular. En la cromatografía de bioafinidad con membrana celular modificada químicamente, el gel de sílice portador está unido covalentemente a la membrana celular, que es relativamente estable, y la membrana celular no se desprende fácilmente, lo que prolonga la vida útil de la columna de cromatografía.

El ruibarbo es una hierba medicinal auténtica de la provincia de Gansu y una de las medicinas tradicionales chinas más utilizadas en la práctica clínica; tiene efectos farmacológicos como antibacteriano, antitumoral, antiinflamatorio, antiviral y reductor de lípidos. Muchos estudiosos y grupos de investigación han confirmado el efecto hipolipemiante del ruibarbo en estudios anteriores, y nuestro grupo de investigación ha examinado el extracto de etanol 30% como la parte eficaz para la reducción de lípidos en ratas hiperlipidémicas, pero su base farmacológica específica sustancia todavía no está claro; El grupo de investigación también preparó una adsorción física L02 membrana celular del hígado material de cromatografía de afinidad biológica, pero su desprendimiento de la membrana celular es grave y su uso es limitado. En vista de ello, en este experimento se utilizó gel de sílice modificado con APTES como soporte para preparar material de cromatografía de afinidad biológica de membrana de células hepáticas L02. La diana de la superficie de la membrana celular se utilizó para adsorber específicamente los componentes químicos del extracto etanólico 30% de ruibarbo. Se realizó un análisis por HPLC de los cambios en los picos cromatográficos de cada componente químico antes y después de la adsorción. Basándose en la tasa de cambio del área del pico cromatográfico, se seleccionaron rápidamente los componentes activos hipolipemiantes del ruibarbo; y se investigó la reutilización del material, proporcionando nuevas ideas para la selección de alto rendimiento de la sustancia base del efecto hipolipemiante del ruibarbo.

El gel de silicona se somete a reacciones de reticulación y condensación con APTES y glutaraldehído, y se une covalentemente a la membrana celular para preparar material de bioafinidad de membrana celular L02 modificado con APTES como portador. La microscopía electrónica de barrido y la espectroscopia infrarroja confirman el éxito de la preparación. El material de bioafinidad de membrana celular L02 modificado con APTES se utilizó para adsorber extracto etanólico 30% de ruibarbo, y los resultados mostraron que 11 componentes podían unirse específicamente; Incluidos 4 glucósidos de antraquinona, 5 glucósidos de antraquinona y 2 componentes desconocidos, entre los cuales la emodina 😯 - β - D-glucósido de aloe, la reína 😯 - β - D-glucósido, la emodina 😯 - β - D-glucósido, y el componente desconocido 1 son los principales componentes específicos que pueden utilizarse como ingredientes activos potenciales para la verificación de la actividad hipolipemiante. Sin embargo, debido a los numerosos objetivos en la superficie de las membranas celulares, este material sólo es adecuado para el cribado preliminar de ingredientes activos hipolipemiantes; Y en la etapa posterior, LC-MS/MS necesita ser utilizado para la identificación estructural preliminar de dos componentes desconocidos. En comparación con la adsorción física de los materiales de bioafinidad de la membrana celular L02, este material introduce enlaces covalentes químicos hasta cierto punto, evitando el desprendimiento de la membrana celular y prolongando los tiempos de uso. Puede utilizarse para el cribado rápido de los principios activos del ruibarbo para reducir los lípidos sanguíneos, y también puede servir de referencia para el cribado rápido de otros principios activos para reducir los lípidos sanguíneos.