Análisis de calidad de rosas basado en la huella digital UPLC y la determinación de dos componentes químicos
La flor de rosa es la flor seca de Rosa chinensis Jacq., una planta de la familia de las rosáceas. También se la conoce como rosa roja, nieve victoriosa, esbelta invitada, rojo nieve combatiente, flor de las cuatro estaciones, preciosa flor de luna y brillante copo de nieve, y se la conoce como la reina de las flores. Las flores de rosa se registraron por primera vez en el Compendio de Materia Médica. Tienen un sabor dulce, una naturaleza cálida y pertenecen al meridiano del hígado. Favorecen la circulación sanguínea, regulan la menstruación, calman el hígado y alivian la depresión. Pueden utilizarse para tratar trastornos menstruales, dismenorrea y amenorrea; estasis sanguínea, hinchazón y dolor, quemaduras, lesiones por caídas, abscesos y escrófula. Se planta en todo el país, principalmente en Yunnan, Hubei, Sichuan y Gansu, y se puede cosechar durante todo el año. La composición química de las rosas es rica y diversa, e incluye flavonoides, taninos, ácidos fenólicos, aceites volátiles, pigmentos y compuestos glucósidos.
En los últimos años, la investigación sobre las rosas ha experimentado ciertos avances. Wu et al. utilizaron la tecnología UPLC-Q-Tof-MS para estudiar las diferencias de componentes químicos no volátiles entre rosas y rosales. Los resultados mostraron que se detectaron 43 componentes en las rosas y 25 componentes en los rosales. Sin embargo, los principales componentes detectados en las rosas fueron glucósidos fenólicos, taninos y fosfolípidos, y el único componente flavonoide detectado fue el kaempferol glucósido. Según los informes de investigación publicados, los flavonoides son los principales componentes activos de las flores de rosa. Shangguan et al. estudiaron las flores de rosa en diferentes épocas de cosecha, midieron el contenido total de flavonoides de las flores de rosa en diferentes períodos de cosecha y evaluaron su actividad antioxidante basándose en su capacidad para eliminar los radicales DPPH e hidroxilo. Exploraron la correlación entre el contenido total de flavonoides y la actividad antioxidante, pero no estudiaron los flavonoides totales de las flores de rosa de diferentes orígenes. En la actualidad, existen muchos estudios sobre las rosas, pero hay pocos informes sobre las normas de calidad de las rosas. La investigación farmacológica moderna ha descubierto que el hiperósido y la isoquercitrina tienen efectos antioxidantes contra el estrés y la apoptosis celular, contra la lesión hepática aguda, antiinflamatorios, antidepresivos y de protección vascular, entre otros, que concuerdan con el efecto de alivio del hígado y el alivio de la depresión de las rosas. Esto indica que el hiperósido y la isoquercitrina son uno de los principales principios activos de las rosas. Bajo la determinación del contenido de flores de rosa en la edición 2020 de la Farmacopea China, sólo se utiliza el método de elución isocrática para limitar la cantidad total de hiperósido e isoquercitrina. Bajo esta condición cromatográfica, sólo se refleja la información de hiperósido e isoquercitrina, pero no puede reflejar completamente la calidad de las flores de rosa. La información de otros componentes característicos, como los flavonoides y los ácidos fenólicos, no puede reflejarse de forma exhaustiva. El espectro de huella dactilar puede reflejar de forma exhaustiva los componentes químicos contenidos en la medicina tradicional china, y se ha convertido en un importante medio de control exhaustivo de la calidad de la medicina tradicional china. Basándose en esto, este experimento estableció un método de huella dactilar UPLC para flores de rosa, y midió simultáneamente la cantidad total de sus componentes flavonoides, hiperósido e isoquercitrina, bajo las condiciones de huella dactilar, con el fin de lograr el control cualitativo y cuantitativo de flores de rosa únicamente a través de métodos de huella dactilar. El análisis de conglomerados y el análisis de componentes principales se combinaron para evaluar flores de rosal de diferentes orígenes, sentando las bases para la investigación del control de calidad de las flores de rosal. Además, este método también es aplicable a las normas de calidad de rosas de la misma familia y género, y puede aplicarse a la investigación de la identificación de rosas y rosales.

 

Determinación del método de preparación y de las condiciones cromatográficas de la muestra de ensayo. En este experimento se investigaron el disolvente de extracción, el método de extracción, el tiempo de extracción y la proporción sólido-líquido. El método cromatográfico se utilizó para maximizar el contenido de información, lograr la mejor eficacia de extracción y garantizar la estabilidad del método. Finalmente, se utilizó metanol 50% como disolvente de extracción, seguido de 30 minutos de tratamiento ultrasónico y una proporción sólido-líquido de 1,0g: 50mL como método de preparación de la muestra. En cuanto a las condiciones cromatográficas, se investigaron diferentes columnas cromatográficas, sistemas de fase móvil, temperaturas de columna, caudales y longitudes de onda de detección. Después de la comparación, se encontró que la selección de Agilent SB C18 como la columna cromatográfica, acetonitrilo 0.2% ácido fosfórico como la fase móvil, la temperatura de la columna de 35 ℃, velocidad de flujo de 0,4mL/min, la forma del pico y el grado de separación de los picos cromatográficos eran buenos; La solución de prueba fue escaneada a longitud de onda completa bajo luz visible UV a 190-400nm, y los resultados mostraron que los picos comunes del espectro de huellas dactilares a 254nm tenían altos valores de respuesta y buenas formas de pico. Además, la absorción máxima de hiperósido e isoquercitrina se observó a 254nm, por lo que se seleccionó 254nm como longitud de onda de detección.
Análisis del espectro de huellas dactilares y resultados de la determinación del contenido. En este estudio se utilizó el "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (versión de 2012) para realizar el análisis de similitud de los espectros de huellas dactilares de 15 lotes de flores de rosa. Se detectaron un total de 30 picos comunes, y la similitud de los espectros de huellas dactilares de los 15 lotes de muestras fue superior a 0,95, lo que indica la consistencia en la composición química de las flores de rosa de diferentes lotes. Se identificaron un total de 10 picos característicos mediante comparación con estándares de referencia, de los cuales 8 eran flavonoides. Utilizando el análisis de conglomerados y el análisis de componentes principales para analizar los espectros de huellas dactilares de rosas de diferentes orígenes, cuando la distancia de conglomerados es 10, las rosas de diferentes lotes pueden dividirse en 5 categorías, lo que indica que las rosas de diferentes orígenes tienen ciertas diferencias. El análisis PCA muestra que existen ciertas diferencias en la calidad de las rosas de distintas regiones. Al medir el contenido de hiperósido e isoquercitrina en 15 lotes de flores de rosa, el contenido total de hiperósido e isoquercitrina fue de 3,88-8,67mg/g, superior al valor de la farmacopea de 0,38%. Esto indica que los 15 lotes de flores de rosa son materiales medicinales cualificados, con el mayor contenido total de hiperósido e isoquercitrina en la ciudad de Zhoukou, provincia de Henan.
El método de huellas dactilares establecido puede aplicarse a la evaluación de la calidad de las rosas. Los espectros de huellas dactilares de 15 lotes de materiales medicinales de rosas se analizaron utilizando el "Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (versión 2012), y se identificaron un total de 22 picos comunes. La similitud de los espectros de huellas dactilares de 15 lotes de materiales medicinales de rosa fue superior a 0,95. Tanto la rosa como el rosal son miembros de la familia Rosaceae y pueden distinguirse por sus características morfológicas, microscópicas y fisicoquímicas. Sin embargo, no existen informes sobre la identificación de huellas dactilares. La huella dactilar UPLC establecida en este estudio puede utilizarse para la identificación de rosa y rosal. De la comparación de los espectros de las huellas dactilares se desprende que ambas tienen 15 componentes comunes, mientras que la rosa tiene 10 componentes exclusivos y el rosal 5 componentes exclusivos.
Sobre la base de establecer la huella digital UPLC de flores de rosa, este estudio identificó múltiples componentes flavonoides y los evaluó utilizando el método de reconocimiento de patrones químicos; Establecer un método para determinar el contenido de hiperósido y isoquercitrina en rosas, proporcionando una base para el control de calidad de las rosas. Este método es sencillo, preciso y puede servir de referencia para posteriores investigaciones sobre las rosas.