Análisis multivariante de componentes activos en diferentes partes de la vid trepadora de tres hojas utilizando la tecnología UFLC-QTRAP-MS/MS
San Ye Qing es la raíz o planta entera de Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg (THDG), de la familia de la uva. Tiene una larga historia de uso medicinal y es uno de los "Nuevos Ocho Sabores de Zhejiang". Tiene efectos desintoxicantes, favorece la circulación sanguínea y disipa el viento. Se utiliza principalmente para convulsiones por fiebre alta, neumonía, asma, hepatitis, reumatismo, escrófula y lesiones causadas por caídas. La investigación farmacológica moderna ha demostrado que el San Ye Qing tiene efectos farmacológicos como antitumoral, antioxidante, antiinflamatorio, antibacteriano, antipirético, analgésico y regulador inmunológico.
La enredadera trepadora de tres hojas crece principalmente en la región meridional del río Yangtsé y tiene una larga historia de uso medicinal en zonas populares de Zhejiang. Se pueden utilizar la planta entera y la raíz. En los últimos años, los estudios han encontrado diferencias significativas en la composición química y la actividad farmacológica entre sus diferentes partes medicinales. Por ejemplo, la actividad antioxidante del extracto de la parte aérea es significativamente mayor que la del extracto de la parte subterránea, mientras que la actividad de eliminación de radicales hidroxilo del extracto de la parte subterránea es significativamente mayor que la del extracto de la parte aérea. Debido a que actualmente el San Ye Qing sólo se incluye en las normas y especificaciones locales de la medicina tradicional china, sus componentes indicadores no están claramente definidos. En los últimos años, la investigación ha demostrado que, además de los flavonoides, ácidos fenólicos, polifenoles, polisacáridos y otros ingredientes activos del San Ye Qing, los taninos, aminoácidos y nucleósidos también tienen actividades fisiológicas potenciales. Entre ellos, los componentes taninos, como las antocianinas B2, tienen efectos inhibidores sobre el cáncer gástrico, los componentes aminoácidos tienen buenos efectos terapéuticos sobre las lesiones hepáticas, y los componentes nucleósidos tienen buenos efectos antibacterianos y antivirales. En la actualidad, la investigación sobre los principios activos de diferentes partes de la vid trepadora de tres hojas se centra principalmente en los flavonoides totales, los ácidos fenólicos totales y los polisacáridos totales, con pocas determinaciones simultáneas del contenido de múltiples categorías de principios activos. Los métodos de análisis para la evaluación de la calidad y el control de las diferentes partes incluyen principalmente la cromatografía líquida de alto rendimiento, la cromatografía de gases-espectrometría de masas y la tecnología de cromatografía líquida-espectrometría de masas. Por lo tanto, con el fin de proporcionar datos de referencia para el control de calidad y la utilización racional de los recursos de las diferentes partes de la trepadora de tres hojas, es necesario establecer un método rápido para determinar el contenido de ingredientes activos en las diferentes partes y llevar a cabo la evaluación de la calidad.
La tecnología de cromatografía líquida ultrarrápida de alto rendimiento y triple cuadrupolo con trampa lineal de iones para espectrometría de masas (UFLC-QTRAP-MS/MS) tiene una alta separación, una alta selectividad y una alta sensibilidad, y puede separar e identificar rápidamente compuestos mixtos. Es adecuada para la separación y el análisis de sistemas complejos multicomponentes de Trifolium repens. Por lo tanto, este estudio utilizó las raíces, tallos y hojas de la vid trepadora de tres hojas como objetos experimentales, y determinó simultáneamente 60 ingredientes activos a través de la tecnología UFLC-QTRAP-MS/MS. Se utilizaron métodos de análisis estadístico multivariante, como el análisis de componentes principales (ACP), el análisis de regresión de mínimos cuadrados parciales (PLS-DA) y el análisis de varianza, para distinguir y revelar las diferencias de principios activos entre las distintas partes, y se aplicó el análisis relacional gris (GRA) para evaluar la calidad de las distintas partes. Los resultados de este estudio pueden proporcionar referencias metodológicas para la cuantificación rápida y el control de calidad de varios ingredientes activos en diferentes partes medicinales de la enredadera trepadora de tres hojas, y sentar las bases para el desarrollo y la utilización racionales de sus recursos.

Los resultados de la investigación indican que existen diferencias significativas en la calidad de las raíces, los tallos y las hojas de la trepadora de tres hojas, así como en el contenido de algunos componentes. Se seleccionaron ocho compuestos mediante PLS-DA, valor VIP y análisis de varianza como marcadores de principios activos para distinguir las diferentes partes. Entre ellos, la vitexina, la isovitexina, la paeoniflorina y la isopaeoniflorina mostraron una tendencia de alto a bajo contenido en hojas, tallos y tubérculos, y todos eran compuestos glucósidos de carbono flavonoides. Debido a la fuerte capacidad de eliminación de radicales DPPH de los glucósidos de carbono flavonoides, los resultados de este experimento también pueden proporcionar datos de referencia para la conclusión de que la actividad antioxidante de la parte aérea de la trepadora de tres hojas es mayor que la de la parte subterránea. Además, el contenido de proantocianidina B2 en los tallos es tan alto como 5029,22 μ g/g, que es 4 veces y 15 veces mayor que en las raíces y las hojas, respectivamente. También tiene importantes actividades antioxidantes y antitumorales, lo que indica que los componentes de proantocianidina pueden desempeñar un papel importante en las actividades metabólicas en diferentes partes de la planta. El valor de correlación relativa (ri) en el análisis relacional gris puede utilizarse para clasificar los grados de calidad de las muestras de raíz, tallo y hoja. Los resultados finales muestran que las muestras de hoja (S7-S12) tienen una clasificación más alta, lo que indica que su calidad es mejor que la de las muestras de tallo y raíz.

En resumen, en este estudio se estableció un método mediante cromatografía líquida de alto rendimiento ultrarrápida con espectrometría de masas de trampa iónica lineal de triple cuadrupolo (UFLC-QTRAP-MS/MS) para determinar simultáneamente 60 ingredientes activos en diferentes partes de la trepadora de tres hojas, y se compararon y evaluaron diferentes partes mediante análisis estadístico multivariante. Los resultados de la determinación del contenido indican que hay abundantes tipos de ingredientes activos en varias partes, entre los cuales el contenido total de múltiples ingredientes activos en las hojas es mayor que en los tallos y tubérculos. Además, el análisis estadístico multivariante, como el análisis de componentes principales, mostró diferencias significativas en los ingredientes activos de las distintas partes de la trepadora de tres hojas, y reveló ocho componentes significativamente diferentes, a saber, vitexina, isovitexina, icariina, isoicariina, proantocianidina B2, tirosina, fenilalanina y leucina. El análisis de correlación gris indica que la calidad de las partes foliares es relativamente mejor, seguida de la de los tallos y tubérculos. Los resultados de este estudio proporcionan una referencia metodológica para la determinación y el control de calidad de los principios activos de las distintas partes de la trepadora de tres hojas, y sientan las bases para el desarrollo y la utilización racionales de sus recursos.