Identifizierung der charakteristischen UPLC-Spektren von vier Originalpflanzen der Xihuangcao-Heilkräuter
Xihuang-Gras ist eine einzigartige chinesische Kräutermedizin im Süden der Fünf Gebirgsketten, die Hitze und Feuchtigkeit beseitigt, das Blut kühlt und Stasen auflöst. Es wird bei Gelbsucht durch feuchte Hitze, abdominaler Dehnung und hypochondrialen Schmerzen, Durchfall durch feuchte Hitze, Durchfall durch Hitzetoxine und traumatischen Verletzungen eingesetzt. Es ist ein häufig verwendetes klinisches Arzneimittel im Süden der Fünf Gebirgsketten und ist auch ein Rohstoff für die Verschreibung der berühmten traditionellen chinesischen Patentarzneimittel und einfachen Zubereitungen großer Vielfalt "entzündungshemmender und cholagoger Tabletten". Im chinesischen Arzneibuch (Ausgabe 2020, Band 4) wird sie als der getrocknete oberirdische Teil von Rabdosia lophanthoides (Buch. - Ham. ex D. DON) H. Hara oder Rabdosia serora (Maxim.) H. Hrar, einer Pflanze aus der Familie der Lippenblütler und der Gattung Rabdosia, aufgeführt. Die ursprüngliche Pflanze, die in den Standards für chinesische Kräutermedizin der Provinz Guangdong enthalten ist, ist Rabdosia lophanthoides R serra、 Fadengemusterter duftender Tee und Gemüse R Lophanthoides und seine faserige Blütenvarietät R lophanthoides var. graciliflora(Benth.) H. Hrar。 Bei der Erforschung und Organisation der Keimplasma-Ressourcen der Xihuangcao-Heilmittel fanden Mitglieder unserer Forschungsgruppe heraus, dass Rabdosia stracheyi (Benth. ex Hook. f.) Hara, eine zur gleichen Gattung gehörende Pflanze, in der Volkskultur ebenfalls häufig als Xihuangcao-Heilmittel verwendet wird. Aufgrund der ähnlichen morphologischen Merkmale dieser Pflanzen ist es schwierig, trockene Arzneistoffe anhand ihres Aussehens zu unterscheiden, und es gab schon immer ein Phänomen der Verwirrung bei den Sortenressourcen der kommerziellen Xihuangcao-Arzneistoffe. Daher ist es von großer Bedeutung, Identifizierungsmethoden für verschiedene Arten von Huangcao zu entwickeln, um die klinische Arzneimittelsicherheit und -wirksamkeit zu gewährleisten und zu verbessern.

Traditionell wurde die Identifizierung der verschiedenen Originalpflanzen der Xihuangcao-Heilmittel unter morphologischen und mikroskopischen Aspekten untersucht. Da trockene medizinische Materialien jedoch oft zerknittert und gebrochen sind, ist es schwierig, sie genau und schnell zu identifizieren. In den letzten Jahren haben Wissenschaftler Studien zur Identifizierung der ursprünglichen Pflanzen auf der Ebene der DNA-Moleküle und der chemischen Komponenten durchgeführt. Die molekulare Identifizierung kann jedoch nur auf der Ebene der Arten zwischen Rabdosia serora und Lycaena angustifolia unterscheiden, so dass es schwierig ist, zwischen den ursprünglichen und abweichenden Sorten von Lycaena angustifolia zu unterscheiden. Was die Erforschung der chemischen Zusammensetzung betrifft, so sind einige Wissenschaftler der Meinung, dass die Fourier-Transformations-Infrarotspektroskopie und die zweidimensionale Korrelations-Infrarotspektroskopie zur Identifizierung von Xihuangcao, gefüttertem duftendem Teegemüse und seinen faserigen Blüten und schmalen Basissorten beitragen können. Einige Wissenschaftler haben auch Forschungen zur Identifizierung der chemischen Zusammensetzung und der Fingerabdruckspektren durchgeführt, aber die experimentellen Ergebnisse können die ursprüngliche Sorte von duftendem Teegemüse nicht sehr gut von ihren Varianten unterscheiden. In den letzten Jahren wurden chemometrische Methoden in der chromatographischen Analyse der traditionellen chinesischen Medizin immer häufiger eingesetzt. Sie können die große Menge an Daten, die bei der chromatographischen Analyse anfallen, weiter analysieren und verarbeiten und spielen in Kombination mit der chromatographischen Analyse eine immer wichtigere Rolle bei der Qualitätskontrolle der traditionellen chinesischen Medizin. Die Ultrahochleistungsflüssigkeitschromatographie (UPLC) hat die Vorteile einer kurzen Analysezeit, einer guten Trennwirkung und einer hohen Empfindlichkeit. Daher wurden in dieser Studie die charakteristischen Spektren von 32 Chargen gesammelter medizinischer Materialien von vier verschiedenen Basispflanzen, nämlich Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai und Longye Xiangchacai, mittels UPLC untersucht und mit chemometrischen Methoden wie Clusteranalyse, Hauptkomponentenanalyse und partieller Kleinstquadrat-Diskriminanzanalyse kombiniert, um diese vier Basispflanzen zu unterscheiden und zu identifizieren, um wertvolle Erkenntnisse für Xixi zu liefern. Als Referenz für die Identifizierung von Huangcao-Medizinprodukten und die Analyse und Bewertung ihrer Qualität.

 

In dieser Studie wurden die Zubereitungsmethoden und die chromatographischen Bedingungen der Testlösung untersucht und optimiert. Die Untersuchungsergebnisse der Extraktionslösungsmittel (Methanol, 80% Methanol, 60% Methanol) zeigten, dass bei Verwendung von Methanol als Extraktionslösungsmittel das erhaltene Probenchromatogramm mehr chromatographische Peaks, relativ größere Peakflächen und eine stabile Basislinie aufwies, was die chemische Zusammensetzung des Xihuangcao-Medizinprodukts besser widerspiegelte. Daher wurde Methanol als Extraktionslösungsmittel für das charakteristische Spektrum des Xihuangcao-Arzneimittels ausgewählt. Die Ergebnisse der Messung der Wellenlängen (250, 254, 260, 280 nm) zeigten, dass es viele chromatographische Peaks bei 254 nm gab, und die Größe jedes Peaks war einheitlich. Daher wurde 254nm als Nachweiswellenlänge gewählt; Die Untersuchungsergebnisse der mobilen Phasen (Methanol -0,1% Ameisensäurewasser, Acetonitril -0,1% Ameisensäurewasser, 0,1% Ameisensäure Methanol -0,1% Ameisensäurewasser und 0,1% Ameisensäure Acetonitril -0,1% Ameisensäurewasser) zeigten, dass bei Verwendung von Methanol -0.1% Ameisensäure-Wasser als mobile Phase für die Elution, die Basislinie war flach, und der Trennungsgrad und die Peakform waren gut; Die Ergebnisse der Säulentemperatur und Flussrate Untersuchung zeigte, dass die Trenneffizienz von jeder chromatographischen Methode war die beste, wenn die Säulentemperatur 30 ℃ und die Flussrate war 0.3mL/min.

In dieser Studie wurde die UPLC verwendet, um eine charakteristische Karte zu erstellen, die für die Identifizierung von vier grundlegenden Pflanzen des Xihuangcao-Heilkrauts geeignet ist. Die Basislinie war flach, der Trennungsgrad war gut, und die Anzahl der gemeinsamen Peaks war groß. In den erstellten Kontrollkarten von Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai und Longye Xiangchacai wurden jeweils 19, 24, 26 und 21 gemeinsame Peaks kalibriert. Anhand der Unterschiede in den gemeinsamen Peaks lassen sich die vier Basispflanzen vorläufig unterscheiden. Aufgrund der geringen Anzahl der gesammelten Chargen von Xianwen Xiangchacai und Longye Xiangchacai wurden bei der Untersuchung der gemeinsamen Peaks chromatographische Peaks mit höheren Ansprechwerten, besserem Trennungsgrad und Peakform für die Kalibrierung ausgewählt, um Fehler im Forschungsprozess zu vermeiden. Die Ergebnisse der Ähnlichkeitsbewertung weisen darauf hin, dass es aufgrund von Unterschieden im Herkunftsort gewisse Unterschiede zwischen denselben medizinischen Ausgangsstoffen gibt; es gibt auch Unterschiede zwischen verschiedenen medizinischen Ausgangsstoffen, von denen die Ähnlichkeit zwischen Xihuangcao und den anderen drei medizinischen Ausgangsstoffen relativ gering ist und klar unterschieden werden kann; die Ähnlichkeit zwischen Xianhua duftendem Teegemüse und Xianwen duftendem Teegemüse ist relativ hoch, und die Ähnlichkeit zwischen Changye duftendem Teegemüse und Xianhua duftendem Teegemüse ist ebenfalls relativ hoch. Der Grund dafür könnte sein, dass Xianhua duftendes Teegemüse, Xianwen duftendes Teegemüse und Changye duftendes Teegemüse alles Pflanzen sind, die zur Gruppe der duftenden Teegemüse mit faltigen Blättern gehören und eine ähnliche chemische Zusammensetzung aufweisen. Die bisherige Forschung hat gezeigt, dass sich die Arten der chemischen Komponenten, die in den ursprünglichen Pflanzen der Xihuangcao-Arzneimittel enthalten sind, kaum unterscheiden und hauptsächlich Terpene, Flavonoide, Phenolsäuren und Sterole umfassen. Unter ihnen sind die Diterpene wichtige Bestandteile der Heilpflanze Xihuangcao. Der Haupttyp von Diterpenen, der in der ursprünglichen Pflanze Xihuangcao enthalten ist, ist der enantiomere Kaempferol-Typ, während das lineare duftende Teegemüse und seine faserige Blütenvarietät sowie das langblättrige duftende Teegemüse hauptsächlich den Kolophonium-Typ und enantiomere Kolophonium-Typ-Diterpene enthalten. Es wird vermutet, dass die geringe Ähnlichkeit zwischen Xihuangcao und der linearen duftenden Teepflanze, der faserigen duftenden Teepflanze und der langblättrigen duftenden Teepflanze mit den Unterschieden bei den Diterpenen zusammenhängen könnte, während die Unterschiede zwischen der linearen duftenden Teepflanze, der faserigen duftenden Teepflanze und der langblättrigen duftenden Teepflanze mit dem Gehalt und den Arten ihrer jeweiligen Bestandteile zusammenhängen könnten.
Die Hauptkomponentenanalyse zeigte, dass Xihuangcao durch den Unterschied in den Hauptkomponentenwerten der einzelnen Basiselemente weiter von liniertem duftendem Teegemüse, duftendem Teegemüse und langblättrigem duftendem Teegemüse unterschieden werden kann. Mit der partiellen Kleinstquadrat-Diskriminanzanalyse können drei Typen primitiver Pflanzen unterschieden werden, nämlich die linienförmige duftende Teepflanze, die faserige duftende Teepflanze und die langblättrige duftende Teepflanze, mit signifikanten Klassifizierungseffekten. Die 15 erhaltenen Klassifizierungsmarker sind die wichtigsten charakteristischen Komponenten, die Unterschiede zwischen den drei Arten verursachen und die für die Unterscheidung dieser drei verschiedenen primitiven Pflanzen von großer Bedeutung sind. Die Identifizierung dieser 15 chromatographischen Peaks bedarf noch weiterer Forschung und Identifizierung.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass die in dieser Studie erstellten UPLC-Charakteristikkarten der vier Basalpflanzen von Xihuangcao durch die Kalibrierung der charakteristischen Peaks und die Ähnlichkeitsbewertung eine vorläufige Unterscheidung der vier verschiedenen Basalpflanzen ermöglichen. Zur besseren Unterscheidung der vier Arten ursprünglicher Pflanzen und zur Suche nach differentiellen Komponenten wurden in dieser Studie weiterhin die Clusteranalyse, die Hauptkomponentenanalyse und die partielle Kleinstquadrat-Diskriminanzanalyse eingesetzt, um die vier Arten ursprünglicher Pflanzen in Xihuangcao vollständig zu unterscheiden. Die Forschungsergebnisse bieten eine wissenschaftliche Methode und Referenz für die Identifizierung, Qualitätsanalyse und Bewertung der ursprünglichen Pflanzen in Xihuangcao medizinischen Materialien.