HPLC-Fingerprint-Spektren und Bestimmung des Gehalts von vier Alkaloiden in verschiedenen Regionen des Fu Mao-Eisenstabhammers
Aconitum flavum Hand. - Mazz. gehört zur Gattung Aconitum aus der Familie der Hahnenfußgewächse (Ranunculaceae). Er ist auch als Duanchongcao, Wuyao und Yizhihao bekannt und ist ein traditionelles chinesisches Heil- und Volkskraut. Seine Wurzeln und Keimlinge werden als Medizin verwendet, und seine getrockneten Wurzeln sind allgemein als "Eisenstabhammer" bekannt. In der chinesischen Kräutermedizin von Shaanxi heißt es, dass der Fumao-Eisenstabhammer die Blutzirkulation fördert, Blutstauungen beseitigt, Schmerzen lindert, Wind und Feuchtigkeit vertreibt, Schwellungen und Giftstoffe reduziert, Blutungen stoppt und Verletzungen durch Stürze, rheumatische Arthritis sowie Schmerzen im unteren Rücken und in den Beinen behandelt.

Literaturberichten zufolge sind Alkaloide die wichtigsten Wirkstoffe der chinesischen Heilpflanze Aconitum carmichaelii, und Aconitin ist der wichtigste chemische Bestandteil mit einem relativ hohen Gehalt. Die Hauptkomponenten, die den Unterschied zwischen Fumao Eisenhammer und Eisenhammer ausmachen, sind 12 Epiaconitin und Aconitin. Fumao Iron Hammer hat einen höheren Gehalt an 12 Epiaconitin und Aconitin als Iron Hammer. Moderne experimentelle pharmakologische Studien haben gezeigt, dass Aconitin, 12-Epiaconitin, Sophocarpin und 3-Acetylaconitin schmerzlindernd, entzündungshemmend und krebshemmend wirken.

Gegenwärtig gibt es nur wenige Berichte über die Qualitätsstandards von Fumao Iron Hammer. Das Fingerabdruck-Spektrum der traditionellen chinesischen Medizin wird häufig zur Qualitätsbewertung verwendet, da es die Art und Menge der in der traditionellen chinesischen Medizin enthaltenen chemischen Komponenten umfassend wiedergeben kann. Daher wurden in dieser Studie HPLC-Fingerprint-Chromatogramme für 15 Chargen unterschiedlicher Herkunft von Fumao Tiebang Hammer-Arzneimitteln erstellt und der Gehalt an vier Alkaloiden bestimmt, darunter 12 Epiaconitin, Song Guoling, Aconitin und 3-Acetylaconitin; Zweitens wurde das chromatografische Fingerabdruck-Ähnlichkeitsbewertungssystem für chinesische Medizin (Version 2012A) für die Ähnlichkeitsbewertung verwendet, und SPSS-Software wurde für die Clusteranalyse und die Hauptkomponentenanalyse verwendet, um eine wissenschaftliche Grundlage für das Screening von Indikatorkomponenten und die umfassende Kontrolle der Qualität der chinesischen Medizin Fumao Tiebang Hammer zu schaffen.

 

 

Bestimmung der chromatographischen Bedingungen. Die maximale Absorptionswellenlänge von 12 Aconitin und Song Guoling liegt bei 210 nm, die maximale Absorptionswellenlänge von Aconitin und 3-Acetylaconitin bei 235 nm. Es wurden 210, 215, 220 und 230 nm untersucht, um die vier Peaks auszugleichen und den höchsten Ansprechwert zu erreichen. Schließlich wurde 215 nm als Nachweiswellenlänge gewählt. Wir untersuchten Agilent Eclipse Plus C18 (50mm × 4,6mm, 5 μ m), Unitary C18 (250mm × 4,6mm, 5 μ m), JADE-PAK ODS (250mm × 4,6mm, 5 μ m) und ACE Excel C18PFP (250mm × 4,6mm, 5 μ m). Nach einem Vergleich des Symmetriefaktors, der Auflösung und der Peakform entschieden wir uns schließlich für die Chromatographiesäule ACE Excel C18 PFP. Wir untersuchten die Zugabe von 2,0, 2,5 und 3,0 ml Triethylamin zur wässrigen Phase und stellten fest, dass die Zugabe von 2,5 ml Triethylamin zu besseren chromatographischen Peakformen und Gradientenelutionseffekten führte. Daher haben wir der wässrigen Phase 2,5 mL Triethylamin zugesetzt. Gemäß dem Arzneibuch und der Literatur wurden mobile Phasen wie Acetonitril: 0,1% Ammoniumacetat, Acetonitril: 0,2% Eisessig (mit Triethylamin auf pH=6,2 eingestellt), Acetonitril und Wasser sowie Acetonitril: 0,1% Phosphorsäure untersucht. Schließlich wurde eine Gradientenelution von Acetonitril: 0,1% Phosphorsäure in wässriger Lösung gewählt, die zu einer glatten Basislinie, einer gleichmäßigen Peakverteilung und einer guten Trennwirkung führte.

Analyse des Fingerabdruckspektrums und der Inhaltsbestimmung. Es gibt Unterschiede in der Anzahl der chromatographischen Peaks, der Retentionszeit und der Peakfläche bei der gleichen Retentionszeit im Fingerabdruckspektrum von Proben unterschiedlicher Herkunft des Fu Mao Eisenstabhammers; die Ergebnisse der Ähnlichkeitsbewertung der Fingerabdruckspektren von 15 Chargen medizinischer Materialien reichten von 0,769 bis 0,952; die Clusteranalyse klassifizierte die Proben S1 und S2 als Klasse I; die Proben S3~S5 sind als Klasse II klassifiziert; S6~S13 sind als Klasse III klassifiziert; S14 und S15 sind als Klasse IV klassifiziert. Übereinstimmend mit den Ergebnissen der Hauptkomponentenanalyse. Die Hauptkomponentenanalyse wurde verwendet, um gemeinsame charakteristische Komponenten herauszufiltern, bestimmende Faktoren zu identifizieren und eine Referenz für die Qualitätsbewertung der medizinischen Materialien des Fumao Iron Rod Hammer zu liefern. Die Hauptkomponentenanalyse verwendet Eigenwerte größer als 1,2 als Extraktionskriterium, und wenn der kumulative Varianzbeitrag größer als 80% ist, werden fünf Hauptkomponenten erhalten, die die meisten Informationen der gemeinsamen Peaks im Fingerabdruckspektrum des Fu Mao Eisenstabhammers darstellen können. Aus den Ergebnissen der Gehaltsbestimmung geht hervor, dass die Gehalte an 12 Epiaconitin, Song Guoling und Aconitin relativ hoch sind, und frühere Literaturauswertungen haben ergeben, dass sie alle entzündungshemmende und schmerzlindernde Aktivitäten haben. Der Gehalt an 3-Acetylaconitin ist jedoch in verschiedenen Proben generell niedrig und wird nicht als Qualitätskontrollindikator für Fuzhong Eisenhammer verwendet. Daher wurden in diesem Versuch auf der Grundlage der Ergebnisse der Gehaltsbestimmung und der Hauptkomponentenanalyse gleichzeitig sechs charakteristische Komponenten verwendet, nämlich 2, 3, 4 (12 Epiaconitin), 5 (Song Guoling), 6 und 15 (Aconitin), die wesentlich zu den fünf Hauptkomponenten beitragen und große Peakflächen haben. Die Peaks 2, 3 und 6 sind unbekannt und können durch Massenspektrometrie weiter bestätigt werden, um zu untersuchen, ob sie als Qualitätskontrollindikatoren für die spätere Phase des Fu Mao Eisenhammers verwendet werden können.

Die Ergebnisse der Gehaltsbestimmung zeigen, dass Yushu (S3), Jiuzhi (S4) und Maqin (S5) im Anbaugebiet Qinghai einen höheren Alkaloidgehalt aufweisen; Wang Rong et al. bestimmten den Alkaloidgehalt des Fumao-Eisenhammers in Guoluo, Yushu, Haidong und Guyuan, Ningxia. Die Ergebnisse zeigten, dass der Alkaloidgehalt im Fumao-Eisenhammer in Guoluo Banma und Yushu am höchsten war, was mit den Ergebnissen dieser Studie übereinstimmt. Der Gesamtgehalt an Aconitin ist der höchste unter den vier Komponenten, während der Gesamtgehalt an 3-Acetylaconitin am niedrigsten ist, was mit den Forschungsergebnissen von Zhao Meiyu übereinstimmt. Die Anbaugebiete mit dem höchsten Gehalt an 12 Aconitin, Song Guoling, Aconitin und 3-Acetylaconitin sind Jiangxi Forest Farm in Yushu, Qinghai, Maqin Airport in Qinghai, Aba in Sichuan und Guinan in Qinghai; die Gesamtmenge der vier Alkaloide in den Proben von Jiangxi Forest Farm und Maqin Airport war ebenfalls am höchsten. Es gibt Unterschiede in der Qualität von Arzneistoffen wie Fu Mao Tie Ban Hammer in verschiedenen Regionen, was auf Faktoren wie Wachstumsumgebung, Klima, Boden, Sammelzeit und Wachstumsjahre der Arzneistoffe zurückzuführen sein kann, die die Anhäufung von Sekundärmetaboliten in den Arzneistoffen beeinflussen, was zu Unterschieden in der Ähnlichkeit und dem Gehalt der Arzneistoffe führt.

Im chinesischen Arzneibuch ist die HPLC-Qualitätskontrolle des Heilkrauts Fu Mao Tie Ban Zhong nicht enthalten. Daher wurde in dieser Studie die HPLC-DAD-Methode verwendet, um das Fingerabdruck-Spektrum von Fu Mao Tie Ban Zhong zu erstellen, und der Inhalt von vier Alkaloid-Komponenten wurde bestimmt. Gleichzeitig wurden eine Ähnlichkeitsbewertung, eine Clusteranalyse und eine Hauptkomponentenanalyse verwendet, um die Qualität von Fu Mao Tie Ban Zhong aus verschiedenen Herkunftsländern umfassend zu bewerten. Die drei Methoden wurden gegenseitig verifiziert und ergänzt, wodurch der Nachteil der Bewertung der Qualität von Heilkräutern auf der Grundlage des Gehalts einer einzigen Komponente vermieden und eine Referenz für die Qualitätsbewertung von Fu Mao Tie Ban Zhong Heilkräutern geschaffen wurde.