Qualitätsbewertung des Dengzhanhua-Standarddekokts anhand des Fingerabdruckatlas und des In-vitro-Tests der antioxidativen Aktivität
Dengzhan Hua, auch bekannt als Dengzhan Xixin, ist eine Pflanze aus der Familie der Korbblütler (Asteraceae) mit dem Namen Erigeron breviscapus (Vant.) Hand- Mazz. Die getrocknete ganze Pflanze wird im Frühjahr und Herbst geerntet und ist in der Ausgabe 2020 des chinesischen Arzneibuchs enthalten. Sie wirkt durchblutungsfördernd, entstauend, schmerzlindernd, windstillend und kältevertreibend. Moderne pharmakologische Studien haben gezeigt, dass Scutellaria baicalensis neuroprotektive, kardiovaskuläre und zerebrovaskuläre schützende, antioxidative, krebshemmende und andere pharmakologische Wirkungen hat. Krebs, kardiovaskuläre und zerebrovaskuläre Erkrankungen stehen in engem Zusammenhang mit oxidativen Schäden, die durch übermäßige reaktive Sauerstoffspezies wie Superoxidanionenradikale, Hydroxylradikale und Lipidradikale im Körper verursacht werden. Durch eine angemessene Einnahme von Antioxidantien können übermäßige freie Radikale im Körper beseitigt werden, was der menschlichen Gesundheit und der Vorbeugung und Bekämpfung von Krankheiten zugute kommt. Aus der Literatur geht hervor, dass Lamplighter eine ausgezeichnete antioxidative Wirkung hat. Die chemische Zusammensetzung von Lamplighter ist komplex, und die Beziehung zwischen chemischer Zusammensetzung und aktiver Dosierungswirkung ist noch nicht ganz klar. Der chemische Fingerabdruck der traditionellen chinesischen Medizin wird häufig zur Qualitätsbewertung der chinesischen Medizin verwendet, da er die in der chinesischen Medizin enthaltenen Inhaltsstoffe charakterisieren kann, was der allgemeinen und unscharfen Natur der Theorie der traditionellen chinesischen Medizin entspricht. Ihre Anwendung ist jedoch zunehmend eingeschränkt, da sie nur die chemischen Informationen der traditionellen chinesischen Medizin widerspiegelt und keine Beziehung zu ihren therapeutischen Wirkungen herstellt. Im Jahr 2020 veröffentlichte das Drug Evaluation Center der National Medical Products Administration die "Technical Guidelines for the Detection of Biological Effects of Traditional Chinese Medicine (Trial)" (Technische Richtlinien für den Nachweis biologischer Wirkungen traditioneller chinesischer Medizin (Versuch)) und befürwortete die Einführung von Qualitätskontrollmethoden in Bezug auf die Aktivität, um die Sicherheit und Wirksamkeit traditioneller chinesischer Medizin bei klinischen Anwendungen zu gewährleisten. Die Untersuchung der "Spektrum-Wirkungs-Beziehung" der traditionellen chinesischen Medizin kann die charakteristische Gesamtausprägung der Wirkstoffe eng mit den Wirkungen mehrerer Indikatoren und Ziele verknüpfen und die pharmakologische Substanzbasis angemessen bestimmen, was auch den Merkmalen der traditionellen chinesischen Medizin entspricht.

Die Standardabkochung der chinesischen Medizin ist eine einzelne Abkochung der traditionellen chinesischen Medizin, die nach standardisierten Verfahren zubereitet und für die standardisierte klinische Medikation verwendet wird, um die Genauigkeit der Medikation und die Konsistenz der Messung zu gewährleisten. Sie dient als Standardreferenz, um zu messen, ob die Formelpartikel der chinesischen Medizin im Wesentlichen mit der klinischen Abkochung übereinstimmen. Der Vorschlag einer Standardabkochung bietet einen materiellen Maßstab für die Erreichung der Qualitätskonsistenz von Darreichungsformen auf der Grundlage der Abkochung traditioneller chinesischer Medizin und für die Einführung wirksamer Qualitätsbewertungsmethoden. In diesem Artikel wird die Standardabkochung von Dianzhanhua als Forschungsobjekt verwendet und seine antioxidative Wirkung durch In-vitro-Experimente zur Fängigkeit von freien DPPH- und ABTS-Radikalen verifiziert. Gleichzeitig wird sein HPLC-Fingerabdruck erstellt und der Gesamtgehalt an Flavonoiden bestimmt. Mit Hilfe der bivariaten Korrelationsanalyse wird nach signifikant korrelierten antioxidativen Komponenten gesucht, die Clusteranalyse (CA) und die Hauptkomponentenanalyse (PCA) wurden für die untersuchten Komponenten durchgeführt, und die orthogonale partielle Kleinstquadrat-Diskriminanzanalyse (OPLS-DA) wurde weiter verwendet, um differentielle Komponenten zu identifizieren; die Qualität der antioxidativen Wirkung wird bewertet, um eine Grundlage für die Qualitätskontrolle von Lamplighter und seinen Zubereitungen zu schaffen.

 

 

Die freien Radikale DPPH und ABTS werden häufig als Indikatoren für die Messung der antioxidativen Aktivität von Wirkstoffen in vitro verwendet. Mit der DPPH-Methode wird die antioxidative Kapazität von Arzneimitteln durch Bindung an Substanzen mit einsamen Elektronenpaaren bestimmt, während die ABTS-Methode die antioxidative Kapazität durch Bindung an hydrophile und lipophile Substanzen ermittelt. Zu den Hauptwirkstoffen von Scutellaria baicalensis gehören Flavonoide. In dieser Studie wurde der Gesamtgehalt an Flavonoiden in 16 Chargen der Standardabkochung von Scutellaria baicalensis mit 2,85-11,28 mg/ml bestimmt. Die antioxidative In-vitro-Aktivität wurde durch das Abfangen von freien DPPH- und ABTS-Radikalen als antioxidative Indikatoren bewertet. Der IC50-Wert von DPPH lag bei 1,00-3,39 mg/ml und der IC50-Wert von ABTS bei 0,254-2,16 mg/ml, was darauf hindeutet, dass die Fähigkeit von Scutellaria baicalensis Standardabkochung, freie ABTS-Radikale abzufangen, stärker ist als die Fähigkeit, freie DPPH-Radikale abzufangen. Die bivariate Korrelationsanalyse nach Pearson ergab, dass die beiden antioxidativen In-vitro-Aktivitäten (IC50-Werte) signifikant negativ mit dem Gesamtgehalt an Flavonoiden korreliert waren (P<0,01), mit Korrelationskoeffizienten von -0,714 bzw. -0,841, was bedeutet, dass die antioxidative Kapazität des Extrakts umso stärker ist, je kleiner der IC50-Wert und je höher der Gesamtgehalt an Flavonoiden ist. Daher ist der Gehalt an Gesamtflavonoiden einer der Indikatoren, die die antioxidative Kraft von Scutellaria baicalensis beeinflussen, und kann als Indikator für die Bewertung der antioxidativen Kraft von Scutellaria baicalensis verwendet werden.
Bei der Erstellung von Fingerabdruckspektren wurden die Chromatographiesäulen Agilent ZORBAX-SB C18, Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 und Agilent Extend C18 experimentell untersucht. Basierend auf dem Vergleich der Anzahl der chromatographischen Peaks und des Trennungsgrades wurde festgestellt, dass Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 eine bessere Leistung aufweist. Wir untersuchten verschiedene Flussraten (0,8, 1, 1,2 mL/min) und fanden heraus, dass 0.Wir untersuchten die binären Systeme 0,1% Ameisensäure-Wasser-Methanol, 0,1% Ameisensäure-Wasser-Acetonitril und 0,1% Ameisensäure-Wasser-Acetonitril-Tetrahydrofuran mit verschiedenen Gradienten. Es wurde festgestellt, dass der Trenneffekt von 0,1% Ameisensäure-Wasser-Acetonitril-Tetrahydrofuran besser war und die Basislinie relativ stabil war. Beim Screening der Detektionswellenlänge von 200-400nm zeigten die Ergebnisse, dass die chromatographischen Peaks, die durch Änderung der Wellenlänge in verschiedenen Zeiträumen erhalten wurden, mehrfach waren und die Basislinie stabil war. Schließlich wurde festgestellt, dass die Wellenlänge 252 nm von 0-9 Minuten und 330 nm von 9-60 Minuten betrug.
In den letzten Jahren wurde in der Literatur über die Fingerabdruckspektren von Heilkräutern wie Scutellaria baicalensis zumeist die HPLC-Methode verwendet, die die Ähnlichkeit der Fingerabdruckspektren bewertet und die gemeinsamen Peaks bestimmt; in der Literatur wurden CA und PCA für die chemische Mustererkennung von Fingerabdruckspektren verwendet und medizinische Materialien klassifiziert, aber keine eingehende Analyse der Gründe für Unterschiede durchgeführt. Auf der Grundlage des Fingerabdruckspektrums der Heilpflanze Lampyridis in der Anfangsphase dieses Artikels wurde ein Fingerabdruckspektrum der Standardabkochung von Lampyridis mit einer Ähnlichkeit von 0,770-0,993 erstellt, und es wurden 21 gemeinsame Peaks ermittelt. Acht bekannte Bestandteile wurden anhand der Referenzsubstanz identifiziert. In dieser Studie wurden mittels bivariater Korrelationsanalyse 10 chromatographische Peaks untersucht, nämlich die Peaks 3, 4 und 6 (Chlorogensäure), die Peaks 7, 11 und 13 (Scutellarin B), Peak 14 (Isochlorogensäure B), Peak 15 (Scutellarin A) sowie die Peaks 17 und 19 (Isochlorogensäure C), die signifikant negativ mit der Fähigkeit korrelierten, freie DPPH-Radikale zu fangen (d.h. je größer die gemeinsame Peakfläche, desto kleiner der IC50-Wert). Die Personenkorrelationskoeffizienten von -0,552, -0,733, -0,626 und -0,665, -0,537, -0,518, -0,767, -0,754, -0,541 und -0,748 deuten darauf hin, dass die entsprechenden chemischen Substanzen die Hauptwirkstoffe beim Abfangen von DPPH-Radikalen sind. Dreizehn chromatographische Peaks, darunter die Peaks 3, 4, 6, 7, 8, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18 (Isochlorogensäure A) und 19, waren signifikant negativ mit dem ABTS-Radikalfänger korreliert. Die persönlichen Korrelationskoeffizienten betrugen -0,594, -0,861, -0,761, -0,829, -0,645, -0,583, -0,676, -0,721, -0,740, 0,574, -0,652, -0,720 bzw. -0,518. Die entsprechenden Substanzen waren die Hauptwirkstoffe für den Abbau der freien ABTS-Radikale. Die antioxidative Aktivität (IC50-Werte), die mit zwei antioxidativen Methoden bestimmt wurde, korrelierte signifikant mit den bekannten Komponenten Chlorogensäure, Scutellarin B, Isochlorogensäure B, Scutellarin A und Chlorogensäure C, was darauf hindeutet, dass diese fünf Komponenten die wichtigsten aktiven Substanzen für die antioxidative Aktivität von Scutellarin sind.
Bei dem Versuch wurden 10 gemeinsame Peaks, die signifikant mit DPPH und dem Gesamtflavonoidgehalt korrelierten, und 13 gemeinsame Peaks, die signifikant mit ABTS und dem Gesamtflavonoidgehalt korrelierten, als Variablen für die CA- bzw. PCA-Analyse verwendet. Die Proben wurden in zwei Kategorien eingeteilt, nämlich in die wilden S014 und S016 und die restlichen 14 Partien der angepflanzten Proben. Es wird vermutet, dass dies mit Faktoren wie der Wachstumsumgebung (Licht, Höhe, Breiten- und Längengrad usw.) und dem Erntezeitraum der Lampionblumen zusammenhängen könnte. Gleichzeitig wurde ein Bewertungsmodell für die Standardabkochung von Scutellaria baicalensis mit diesen Komponenten als Variablen erstellt. Die Rangfolge der Punktzahlen für die 16 Chargen des Standardsuds stimmte im Wesentlichen mit der Rangfolge der antioxidativen In-vitro-Aktivität überein. Auf der Grundlage von CA und PCA führte der Autor außerdem eine OPLS-DA-Analyse durch und identifizierte vier Hauptdifferenzialkomponenten in Bezug auf die Fängigkeit von freien DPPH-Radikalen: Peak 11, 15 (Scutellarin), 14 (Isochlorogensäure B) und Peak 13 (Scutellarin); die vier Hauptdifferenzialkomponenten in Bezug auf die Beseitigung von freien ABTS-Radikalen sind Peak 11, 15, 14 und Peak 8 (Scutellarin). Die Forschungsergebnisse deuten darauf hin, dass bei der Qualitätskontrolle von Scutellaria baicalensis neben dem hohen Gehalt an Scutellaria baicalensis B (d.h. Baicalin) auch andere Qualitätskontrollindikatoren mit starker pharmakologischer Aktivität in geeigneter Weise hinzugefügt werden sollten.
Zusammenfassend lässt sich sagen, dass diese Studie den chemischen Fingerabdruck mit der Bewertung der biologischen Aktivität kombiniert und die antioxidativen Wirkstoffe des Standarddekokts von Lampyridis durch Spektralkorrelationsforschung untersucht. Die etablierte Methode ist einfach zu handhaben und die Ergebnisse sind zuverlässig, was eine Grundlage für weitere Forschungen über die pharmakologischen Wirkungen und die Qualitätsbewertung von Lampyridis darstellen kann. In Zukunft kann der Probenumfang vergrößert und die Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie-Technologie eingesetzt werden, um die gemeinsamen Peaks der unbekannten Komponenten im Standardsud zu identifizieren, ihre pharmakologischen Aktivitäten zu untersuchen und das Spektrum-Wirkungs-Verhältnis mehrerer pharmakologischer Aktivitäten umfassend zu untersuchen, was eine Grundlage für die Qualitätsforschung von Scutellaria baicalensis darstellt.