Undersøgelse af kvalitetsforskelle mellem Zhejiang Fritillaria og Hubei Fritillaria baseret på HPLC-ELSD-fingeraftryk og multikomponentkvantificering
Fritillaria thunbergii Miq., et tørret løg af liljefamilien Fritillaria thunbergii Miq., er opført som den bedste af de "otte smagsstoffer i Zhejiang" og er blevet medtaget i forskellige udgaver af Folkerepublikken Kinas farmakopé (i det følgende benævnt "den kinesiske farmakopé"). Den høstes, vaskes, fugtes, skæres i tykke skiver og tørres, når planten visner i den tidlige sommer; Xi kaldte den "Zhe Bei Pian". Zhejiang Fritillaria har den funktion at fjerne varme, opløse slim, lindre hoste, afgifte og sprede knuder og fjerne karbunkler. Den bruges klinisk til at behandle vindvarme, slimhoste, lungeabsces, brystabsces og sår.

Hubei Fritillaria er et tørret løg af Fritillaria hupehensis Hsiao et K.C. Hsiao, en plante i liljefamilien. Dens vigtigste funktioner er at fjerne varme og slim, lindre hoste og sprede knuder. Den bruges ofte i klinisk praksis til at behandle symptomer som lungevarmehoste og slimhoste. Både Zhejiang Fritillaria og Hubei Fritillaria tilhører slægten Fritillaria og kan bruges som traditionel kinesisk medicin til medicinske formål; De aktive ingredienser i begge er alkaloider, men deres typer er forskellige. De vigtigste aktive ingredienser i Zhejiang Fritillaria inkluderer Fritillaria A, Fritillaria B, IsoFritillaria A osv. De vigtigste aktive ingredienser i Hubei Fritillaria inkluderer Fritillaria A, Fritillaria B, Hubeijia, Hubeiyi, Hubeixin osv. Derfor er der visse forskelle i de farmakologiske virkninger mellem Zhejiang Fritillaria og Hubei Fritillaria. I den kinesiske farmakopé fra 2020 blev Zhejiang Fritillaria og Hubei Fritillaria opført separat under kategorien lægeurter, hvilket indikerer, at der er visse forskelle mellem de to lægeurter.

På grund af den store variation og prisforskel på Fritillaria-arter på markedet er der et fænomen med gensidig substitution eller substitution af falsk Fritillaria og Hubei Fritillaria. På grund af begrænsninger i morfologisk, mikroskopisk og fysisk-kemisk identifikation er det ikke muligt effektivt at påvise ligheder og forskelle i kvaliteten af de to medicinske materialer. Derfor er det nødvendigt at etablere en mere specifik og præcis metode til effektivt at skelne og differentiere mellem de to.

2020-udgaven af den kinesiske farmakopé specificerer, at indholdsbestemmelsesindikatorerne for Fritillaria thunbergii er Fritillaria A og Fritillaria B, mens indholdsbestemmelsesindikatoren for Fritillaria thunbergii i Hubei-provinsen vælger Fritillaria B, og indholdsgrænsen for Fritillaria thunbergii B i Hubei-provinsen er betydeligt højere end den samlede grænse for Fritillaria thunbergii A og Fritillaria thunbergii B i Zhejiang-provinsen, hvilket giver objektive betingelser for forfalskning og anvendelse af Fritillaria thunbergii. I lyset af det komplekse kemiske sammensætningssystem i traditionel kinesisk medicin er det ikke længere tilstrækkeligt at bruge en enkelt kvantitativ model til at opfylde behovene for kvalitetskontrol i moderne kinesisk medicin. På nuværende tidspunkt er der kun få rapporter om forskellen i indholdet af aktive ingredienser mellem de to typer Fritillaria. I denne undersøgelse blev HPLC-ELSD-metoden derfor brugt til at etablere fingeraftryksspektre af Fritillariae Thunbergii Bulbus (FTB) og Fritillariae Hupehensis Bulbus (FHB) i henholdsvis Fritillariae thunbergii og Fritillariae Hupehensis Bulbus i Hubei. Samtidig blev fem identiske alkaloidkomponenter bestemt, og der blev gennemført en omfattende sammenlignende undersøgelse af Fritillariae thunbergii og Hubei ud fra både kvalitative og kvantitative aspekter, hvilket gav en reference til identifikation og kvalitetsevaluering af de to medicinske materialer.

 

Ved etablering og anvendelse af fingeraftryksspektre blev der etableret HPLC-ELSD-fingeraftryksspektre af Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii baseret på karakteristika for alkaloidkomponenter i Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii. Resultaterne af lighedsevalueringen viste, at fingeraftryksspektrene for den samme Fritillaria thunbergii var meget ens. Derfor kan fingeraftryksspektre bruges som fælles træk til forskning i kvalitetskontrol af Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii. Ved at sammenligne forskellene mellem fingeraftryksspektrene for de to typer Fritillaria kan man se, at fingeraftryksspektret for Fritillaria thunbergii tydeligt mangler toppen af Hubeijia-pigmentspektret, eller at Hubeijia-pigmentindholdet er ekstremt lavt, hvilket gør det vanskeligt at opdage i Fritillaria thunbergii. Derfor kan Hubeijia fungere som en differentieret biomarkør til at skelne og differentiere mellem to typer Fritillaria, Zhejiang Fritillaria og Hubei Fritillaria.

Ved at bruge toparealet af den fælles top som en variabel blev HCA-, PCA- og OPLS-DA-analyser udført separat. Resultaterne af HCA og PCA var i stand til effektivt at skelne og differentiere mellem Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii, hvilket indikerer, at kombinationen af fingeraftryk, HCA eller PCA er en effektiv metode til at identificere Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii. For yderligere at afklare forskellene i kemisk sammensætning mellem de to typer Fritillaria thunbergii blev OPLS-DA-analyse brugt til at identificere fire forskellige biomarkører. I henhold til betydningen af forskellene blev de sorteret som Fritillaria thunbergii>Peak 4>Berberine A>Berberine B, hvilket indikerer, at der er betydelige forskelle i indholdet af de ovennævnte komponenter mellem de to typer Fritillaria thunbergii. Denne forskel skyldes til dels forskellene i selve de medicinske materialer. Forskellige oprindelser kan også være tæt forbundet med faktorer som plantemiljø og vækstcyklus for lægeurter.

Med hensyn til valg af indikatorer for indholdsbestemmelse er alkaloiderne i Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii hovedsageligt opdelt i steroidalkaloider og steroidalkaloider. Forskning har vist, at alkaloider har forskellige farmakologiske aktiviteter såsom slimløsende, hostedæmpende, astmalindrende, antiinflammatoriske og antitumoreffekter, som er i overensstemmelse med de funktionelle indikationer på Zhejiang Fritillaria og Hubei Fritillaria. Fem identiske alkaloider blev identificeret fra HPLC-ELSD-fingeraftryksspektrene fra Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii. Resultaterne af indholdsbestemmelsen viste, at bortset fra indholdsforskellen af ibuprofen havde de andre fire komponenter i Fritillaria thunbergii, Berberine A, Berberine B og IsoBerberine A betydelige indholdsforskelle. Blandt dem var indholdet af Berberine A i Fritillaria thunbergii signifikant højere end i Fritillaria thunbergii, mens indholdet af Berberine A, Berberine B og IsoBerberine A var signifikant lavere end i Fritillaria thunbergii. Ved at måle indholdet af Berberine A, Berberine A, Berberine B og IsoBerberine A er det derfor muligt at skelne mellem Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii. De opnåede forskningsresultater er stort set i overensstemmelse med resultaterne af OPLS-DA-analysen. Der er litteraturrapporter om, at forskellene i indholdet og andelen af alkaloider kan være en vigtig faktor, der fører til forskellene i hoste, slim, antibakterielle og antiinflammatoriske virkninger mellem de to typer Fritillaria thunbergii. Samtidig bestemmelse af flere alkaloider er af stor betydning for kvalitetskontrol og evaluering af klinisk orienterede traditionelle kinesiske lægemidler, Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii. Derfor anbefales det at øge bestemmelsen af berberin og isoberberin i kvalitetskontrollen af Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii medicinske materialer.

Sammenfattende etablerede denne undersøgelse HPLC-ELSD-fingeraftryksmetoder for Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii og bestemte samtidig indholdet af fem alkaloider, som kan give vigtige referencer til identifikation og kvalitetskontrol af Fritillaria thunbergii og Fritillaria thunbergii medicinske materialer.