Identifikation af UPLC-karakteristiske spektre af fire originale planter af Xihuangcao-lægeurter
Xihuang Grass er en unik kinesisk urtemedicin i den sydlige del af Five Ridges, som har den virkning, at den fjerner varme og fugt, køler blodet og fjerner stasis. Det bruges til gulsot med fugtig varme, udspilet mave og hypokondriske smerter, diarré med fugtig varme, diarré med varmetoksiner og traumatiske skader. Det er en almindeligt anvendt klinisk medicin i den sydlige del af Five Ridges og er også et råmateriale til recept på de berømte traditionelle kinesiske patentlægemidler og enkle præparater med stor variation "antiinflammatoriske og kolagogue tabletter". Den kinesiske farmakopé (2020-udgaven, bind 4) registrerer den som den tørrede overjordiske del af Rabdosia lophanthoides (Buch. - Ham. ex D. DON) H. Hara eller Rabdosia serora (Maxim.) H. Hrar, en plante, der tilhører Labiatae-familien og slægten Rabdosia. Den oprindelige plante, der indgår i Guangdong Provincial Chinese Herbal Medicine Standards, er Rabdosia lophanthoides R serra、 Trådmønstret duftende te og grøntsag R Lophanthoides og dens fibrøse blomstersort R lophanthoides var. graciliflora(Benth.) H. Hrar。 Hrar。 Under processen med at undersøge og organisere kimplasmeressourcerne for Xihuangcao-medicinske materialer fandt medlemmer af vores forskningsgruppe ud af, at Rabdosia stracheyi (Benth. ex Hook. f.) Hara, en plante, der tilhører samme slægt, også ofte bruges som Xihuangcao-medicinske materialer i folkekulturen. På grund af disse planters lignende morfologiske egenskaber er det vanskeligt at skelne mellem tørre medicinske materialer baseret på deres udseende, og der har altid været et fænomen af forvirring i de forskellige ressourcer af Xihuangcao kommercielle medicinske materialer. Derfor er det af stor betydning at etablere identifikationsmetoder for forskellige typer Huangcao for at sikre og forbedre den kliniske lægemiddelsikkerhed og -effektivitet.

Traditionelt er identifikationen af de forskellige oprindelige planter i Xihuangcaos medicinske materialer blevet undersøgt ud fra morfologiske og mikroskopiske aspekter. Men da tørre medicinske materialer ofte er krøllede og ødelagte, er det vanskeligt at identificere dem præcist og hurtigt. I de senere år har forskere gennemført identifikationsstudier af de oprindelige planter på niveau med DNA-molekyler og kemiske komponenter. Molekylær identifikation kan dog kun skelne mellem Rabdosia serora og Lycaena angustifolia på artsniveau, hvilket gør det vanskeligt at skelne mellem den oprindelige og de forskellige varianter af Lycaena angustifolia. Med hensyn til forskning i kemisk sammensætning mener nogle forskere, at Fourier transform infrarød spektroskopi og todimensionel korrelationsinfrarød spektroskopi kan opnå identifikation af Xihuangcao, Lined Fragrant Tea Vegetable og dens fibrøse blomster og smalle basissorter. Nogle forskere har også forsket i identifikation af indhold af kemisk sammensætning og fingeraftryksspektre, men de eksperimentelle resultater kan ikke skelne den oprindelige sort af Lined Fragrant Tea Vegetable fra dens varianter særlig godt. I de senere år er kemometriske metoder i stigende grad blevet brugt i den kromatografiske analyse af traditionel kinesisk medicin. De kan yderligere analysere og behandle den store mængde data, der genereres ved kromatografisk analyse, og spille en stadig vigtigere rolle i kvalitetskontrollen af traditionel kinesisk medicin, når den kombineres med kromatografisk analyse. Ultrahøjtydende væskekromatografi (UPLC) har fordelene ved kort analysetid, god separationseffekt og høj følsomhed. Derfor brugte denne undersøgelse UPLC til at studere de karakteristiske spektre af 32 partier af indsamlede medicinske materialer fra fire forskellige basisplanter, nemlig Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai og Longye Xiangchacai, og kombineret med kemometriske metoder som klyngeanalyse, hovedkomponentanalyse og partiel mindste kvadraters diskriminantanalyse for at skelne og identificere disse fire basisplanter for at give værdifuld indsigt i Xixi. Giver reference til identifikation af Huangcao-medicinske materialer og analyse og evaluering af deres kvalitet.

 

Denne undersøgelse screenede og optimerede forberedelsesmetoderne og de kromatografiske betingelser for testopløsningen. Undersøgelsesresultaterne af ekstraktionsmidler (methanol, 80% methanol, 60% methanol) viste, at når methanol blev brugt som ekstraktionsmiddel, havde det opnåede prøvekromatogram flere kromatografiske toppe, relativt større topområder og en stabil baseline, som bedre afspejlede den kemiske sammensætning af Xihuangcao-lægemiddel. Derfor blev methanol valgt som ekstraktionsmiddel til det karakteristiske spektrum af Xihuangcao-medicinsk materiale; Resultaterne af måling af bølgelængder (250, 254, 260, 280 nm) viste, at der var mange kromatografiske toppe ved 254 nm, og størrelsen af hver top var ensartet. Derfor blev 254 nm valgt som detektionsbølgelængde; Undersøgelsesresultaterne af mobile faser (methanol -0,1% myresyrevand, acetonitril -0,1% myresyrevand, 0,1% myresyremethanol -0,1% myresyrevand og 0,1% myresyreacetonitril -0,1% myresyrevand) viste, at når man brugte methanol -0.1% myresyrevand som den mobile fase til eluering, var basislinjen flad, og separationsgraden og topformen var god; Resultaterne af undersøgelsen af søjletemperatur og strømningshastighed viste, at separationseffektiviteten for hver kromatografisk metode var den bedste, når søjletemperaturen var 30 ℃, og strømningshastigheden var 0,3 ml / min.

I denne undersøgelse blev UPLC brugt til at etablere et karakteristisk kort, der kan anvendes til identifikation af fire grundlæggende planter af Xihuangcao lægeurt. Baseline var flad, separationsgraden var god, og antallet af fælles toppe var stort. I de etablerede kontrolkort over Xihuangcao, Xianwen Xiangchacai, Xianxiang Xiangchacai og Longye Xiangchacai blev der kalibreret henholdsvis 19, 24, 26 og 21 fælles toppe. Baseret på forskellene i deres fælles toppe kan de fire basisplanter foreløbigt skelnes fra hinanden. På grund af det lille antal indsamlede partier af Xianwen Xiangchacai og Longye Xiangchacai blev der for at undgå fejl i forskningsprocessen valgt kromatografiske toppe med højere responsværdier, bedre separationsgrad og topform til kalibrering, når man studerede fælles toppe. Resultaterne af lighedsevalueringen viser, at der på grund af forskelle i oprindelsessted er visse forskelle mellem de samme originale medicinske materialer; Der er også forskelle mellem forskellige basismedicinske materialer, blandt hvilke ligheden mellem Xihuangcao og de tre andre basismedicinske materialer er relativt lav og kan skelnes tydeligt; Ligheden mellem Xianhua duftende te-grøntsager og Xianwen duftende te-grøntsager er relativt høj, og ligheden mellem Changye duftende te-grøntsager og Xianhua duftende te-grøntsager er også relativt høj. Årsagen kan være, at Xianhua duftende te-grøntsager, Xianwen duftende te-grøntsager og Changye duftende te-grøntsager alle er planter, der tilhører den rynkede bladduftende te-grøntsagsgruppe med lignende kemiske sammensætningstyper. Eksisterende forskning har vist, at der er lille forskel på de typer kemiske komponenter, der er indeholdt i de oprindelige planter af Xihuangcao medicinske materialer, som hovedsageligt omfatter terpener, flavonoider, fenoliske syrer og steroler. Blandt dem er diterpener vigtige komponenter i lægeurten Xihuangcao. Den vigtigste type diterpener i den oprindelige plante Xihuangcao er den enantiomere kaempferoltype, mens den lineære duftende teblomst og dens fibrøse blomstervariant samt den langbladede duftende teblomst hovedsageligt indeholder diterpener af kolofoniumtypen og den enantiomere kolofoniumtype. Det spekuleres i, at den lave lighed mellem Xihuangcao og lineær duftende teblomst, fibrøs duftende teblomst og langbladet duftende teblomst kan være relateret til forskellene i typerne af diterpener, mens forskellene mellem lineær duftende teblomst, fibrøs duftende teblomst og langbladet duftende teblomst kan være relateret til indholdet og typerne af deres respektive komponenter.
Principal komponentanalyse viste, at Xihuangcao yderligere kan skelnes fra Lined Fragrant Tea Vegetable, Fragrant Tea Vegetable og Long leaved Fragrant Tea Vegetable ved forskellen i principal komponent score for hvert basiselement. Partiel diskriminantanalyse med mindste kvadraters metode kan skelne mellem tre typer primitive planter, nemlig linjeformet duftende teplante, fibrøs duftende teplante og langbladet duftende teplante, med signifikante klassifikationseffekter. De 15 klassificeringsmarkører er de vigtigste karakteristiske komponenter, der forårsager forskelle mellem de tre, og som er af stor betydning for at skelne mellem disse tre forskellige primitive planter. Identifikationen af disse 15 kromatografiske toppe kræver stadig yderligere forskning og identifikation.
Sammenfattende kan de UPLC-karakteristiske kort over de fire basalplanter i Xihuangcao, der blev etableret i denne undersøgelse, foreløbigt skelne mellem de fire forskellige basalplanter gennem kalibrering af karakteristiske toppe og lighedsevaluering. For bedre at kunne skelne mellem de fire typer af oprindelige planter og søge efter differentierede komponenter brugte denne undersøgelse yderligere klyngeanalyse, hovedkomponentanalyse og partiel mindste kvadraters diskriminantanalyse til fuldstændigt at skelne mellem de fire typer af oprindelige planter i Xihuangcao. Forskningsresultaterne giver en videnskabelig metode og reference til identifikation, kvalitetsanalyse og evaluering af de oprindelige planter i Xihuangcaos medicinske materialer.