HPLC-fingeraftryksspektre og bestemmelse af indholdet af fire alkaloider i forskellige områder af Fu Mao-jernstangshammeren
Aconitum flavum Hand. - Mazz. hører til Aconitum-slægten i Ranunculaceae-familien. Den er også kendt som Duanchongcao, Wuyao og Yizhihao og er en traditionel kinesisk lægeurt og folkeurt. Dens rødder og frøplanter bruges som medicin, og dens tørrede rødder er almindeligt kendt som "jernstangshammer". I Shaanxi Chinese Herbal Medicine står der, at Fumao Iron Rod Hammer fremmer blodcirkulationen, fjerner blodstasis, lindrer smerter, fordriver vind og fugt, reducerer hævelser og toksiner, stopper blødninger, behandler skader forårsaget af fald, leddegigt og smerter i lænd og ben.

Ifølge litteraturrapporter er alkaloider de vigtigste aktive ingredienser i den kinesiske lægeurt, Aconitum carmichaelii, og aconitin er den vigtigste kemiske komponent med et relativt højt indhold. Hovedkomponenterne i forskellen i indhold mellem Fumao Iron Hammer og Iron Hammer er 12 epiaconitine og aconitine. Fumao Iron Hammer har et højere indhold af 12 epiaconitin og aconitin end Iron Hammer. Moderne farmakologiske forsøg har vist, at aconitin, 12 epiaconitin, sophocarpin og 3-acetylaconitin har smertestillende, antiinflammatoriske og kræfthæmmende aktiviteter.

På nuværende tidspunkt er der kun få rapporter om kvalitetsstandarderne for Fumao Iron Hammer. Fingeraftryksspektret for traditionel kinesisk medicin bruges i vid udstrækning til kvalitetsevaluering, hvilket omfattende kan afspejle typer og mængder af kemiske komponenter indeholdt i traditionel kinesisk medicin. Derfor etablerede denne undersøgelse HPLC-fingeraftrykskromatogrammer for 15 partier af forskellige oprindelser af Fumao Tiebang Hammer-medicinske materialer og bestemte indholdet af fire alkaloider, herunder 12 epiaconitin, Song Guoling, aconitin og 3-acetylaconitin; For det andet blev den kinesiske medicins kromatografiske fingeraftrykslighedsevalueringssystem (2012A-version) brugt til lighedsevaluering, og SPSS-software blev brugt til klyngeanalyse og hovedkomponentanalyse for at tilvejebringe et videnskabeligt grundlag for screening af indikatorkomponenter og omfattende kontrol af kvaliteten af den kinesiske medicin Fumao Tiebang Hammer.

 

 

Bestemmelse af kromatografiske forhold. Den maksimale absorptionsbølgelængde for 12 aconitin og Song Guoling er 210 nm, og den maksimale absorptionsbølgelængde for aconitin og 3-acetylaconitin er 235 nm. 210, 215, 220 og 230 nm blev undersøgt for at afbalancere de fire toppe og opnå den højeste responsværdi. Endelig blev 215 nm valgt som detektionsbølgelængde. Vi undersøgte Agilent Eclipse Plus C18 (50 mm × 4,6 mm, 5 μ m), Unitary C18 (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m), JADE-PAK ODS (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m) og ACE Excel C18PFP (250 mm × 4,6 mm, 5 μ m). Ved at sammenligne symmetrifaktoren, opløsningen og topformen valgte vi i sidste ende den kromatografiske kolonne ACE Excel C18 PFP. Vi undersøgte tilsætningen af 2,0, 2,5 og 3,0 ml triethylamin til den vandige fase og fandt, at tilsætningen af 2,5 ml triethylamin resulterede i bedre kromatografiske topformer og gradientelueringseffekter. Derfor tilsatte vi 2,5 ml triethylamin til den vandige fase. I henhold til farmakopéen og litteraturen blev mobile faser som acetonitril: 0,1% ammoniumacetat, acetonitril: 0,2% iseddikesyre (justeret til pH=6,2 med triethylamin), acetonitril og vand og acetonitril: 0,1% phosphorsyre undersøgt. Endelig blev der valgt en gradienteluering af acetonitril: 0,1% fosforsyre i vandig opløsning, hvilket resulterede i en jævn basislinje, ensartet topfordeling og god separationseffekt.

Analyse af fingeraftryksspektrum og indholdsbestemmelse. Der er forskelle i antallet af kromatografiske toppe, retentionstid og topareal ved samme retentionstid i fingeraftryksspektret af prøver fra forskellige oprindelser af Fu Mao jernstangshammer; Lighedsevalueringsresultaterne af fingeraftryksspektrene af 15 partier af medicinske materialer varierede fra 0,769 til 0,952; Klyngeanalyse klassificerede S1- og S2-prøver som klasse I; Prøver S3 ~ S5 er klassificeret som klasse II; S6 ~ S13 er klassificeret som klasse III; S14 og S15 er klassificeret som klasse IV. I overensstemmelse med resultaterne af hovedkomponentanalysen. Hovedkomponentanalyse blev brugt til at screene fælles karakteristiske komponenter, identificere afgørende faktorer og give reference til kvalitetsevalueringen af Fumao Iron Rod Hammer medicinske materialer. Hovedkomponentanalyse bruger egenværdier større end 1,2 som ekstraktionskriterium, og når den kumulative variansbidragshastighed er større end 80%, opnås der fem hovedkomponenter, som kan repræsentere det meste af informationen om de fælles toppe i fingeraftryksspektret af Fu Mao-jernstangshammeren. Ifølge resultaterne af indholdsbestemmelsen kan det ses, at indholdet af 12 epiaconitine, Song Guoling og aconitine er relativt højt, og tidligere litteraturgennemgange har fundet, at de alle har antiinflammatoriske og smertestillende aktiviteter. Indholdet af 3-acetylaconitin er dog generelt lavt i forskellige prøver og bruges ikke som en kvalitetskontrolindikator for Fuzhong Iron Hammer. Baseret på resultaterne af indholdsbestemmelse og hovedkomponentanalyse brugte dette eksperiment derfor samtidig seks karakteristiske komponenter, nemlig 2, 3, 4 (12 epiaconitine), 5 (Song Guoling), 6 og 15 (aconitine), som bidrager væsentligt til de fem hovedkomponenter og har store topområder. Blandt dem er top 2, 3 og 6 ukendte og kan bekræftes yderligere ved hjælp af massespektrometri for at undersøge, om de kan bruges som kvalitetskontrolindikatorer for den senere fase af Fu Mao Iron Hammer.

Resultaterne af indholdsbestemmelsen viser, at Yushu (S3), Jiuzhi (S4) og Maqin (S5) i Qinghai-produktionsområdet har højere alkaloidindhold; Wang Rong et al. bestemte alkaloidindholdet i Fumao-jernhammeren i Guoluo, Yushu, Haidong og Guyuan, Ningxia. Resultaterne viste, at alkaloidindholdet var højest i Fumao-jernhammeren i Guoluo Banma og Yushu, hvilket stemmer overens med resultaterne af denne undersøgelse. Den samlede mængde aconitin er den højeste blandt de fire komponenter, mens den samlede mængde 3-acetylaconitin er den laveste, hvilket stemmer overens med Zhao Meiyus forskningsresultater. Produktionsområderne med det højeste indhold af 12 aconitin, Song Guoling, aconitin og 3-acetylaconitin er Jiangxi Forest Farm i Yushu, Qinghai, Maqin Airport i Qinghai, Aba i Sichuan og Guinan i Qinghai; Den samlede mængde af fire alkaloider i prøverne fra Jiangxi Forest Farm og Maqin Airport var også den højeste. Der er forskelle i kvaliteten af medicinske materialer som Fu Mao Tie Ban Hammer i forskellige regioner, hvilket kan skyldes faktorer som vækstmiljø, klima, jord, indsamlingstid og vækstår for de medicinske materialer, som påvirker ophobningen af sekundære metabolitter i de medicinske materialer, hvilket fører til forskelle i ligheden og indholdet af de medicinske materialer.

Den kinesiske farmakopé dækker ikke HPLC-kvalitetskontrol af lægeurten Fu Mao Tie Ban Zhong. I denne undersøgelse blev HPLC-DAD-metoden derfor brugt til at etablere fingeraftryksspektret for Fu Mao Tie Ban Zhong, og indholdet af fire alkaloidkomponenter blev bestemt. Samtidig blev lighedsevaluering, klyngeanalyse og hovedkomponentanalyse brugt til omfattende at evaluere kvaliteten af Fu Mao Tie Ban Zhong fra forskellige oprindelser. De tre metoder blev gensidigt verificeret og suppleret for at undgå ulempen ved at evaluere kvaliteten af lægeurter baseret på indholdet af en enkelt komponent og for at give en reference til kvalitetsevalueringen af Fu Mao Tie Ban Zhong-lægemidler.