Traditionel kinesisk medicin til fjernelse af blodstase og aktivering af kollateraler forbedrer nyrebetændelse hos rotter med diabetesnefropati ved at hæmme infiltration og aktivering af makrofager gennem TAK1/JNK-vejen
Diabetesnefropati (DN) er en almindelig og alvorlig komplikation til diabetes og den primære årsag til nyresygdom i slutstadiet på verdensplan. På nuværende tidspunkt omfatter behandlingen af DN hovedsageligt begrænsning af natriumindtaget i kosten, kontrol af blodsukkeret, sænkning af blodtrykket og blokering af renin-angiotensinsystemet (RAS). Selv om det til en vis grad kan forsinke udviklingen af DN, er effekten ikke ideel. Flere og flere beviser tyder på, at inflammatorisk respons spiller en vigtig rolle i forekomsten og udviklingen af diabetisk nefropati, og makrofaginfiltration og -aktivering er centrale led i nyrebetændelse. TAK1/JNK-signalvejen er en vigtig vej, der regulerer makrofaginfiltration og -aktivering. Derfor er blokering af TAK1/JNK-signalvejen en effektiv strategi til forebyggelse og behandling af DN.

Vores forskningsgruppe mener, at "blodstasis, der hindrer kollateraler", er den grundlæggende patogenese af diabetisk nefropati, og tilføjelse af traditionel kinesisk medicin til fjernelse af blodstasis og fremme af kollateraler på basis af syndromdifferentiering og behandling er blevet det grundlæggende princip for behandling af diabetisk nefropati. Den traditionelle kinesiske medicin til fjernelse af blodstasis og fremme af blodcirkulationen indeholder adskillige lægemidler. Efter mere end 20 års klinisk praksis og gentagen screening har vores forskningsgruppe endelig bestemt fem kinesiske lægemidler, nemlig Chuanxiong, Danshen, Dilong, Leech og Scorpion, som de relativt faste basislægemidler til behandling af DN. Vores tidligere forskning har bekræftet, at traditionel kinesisk medicin til fjernelse af blodstasis og fremme af blodcirkulationen kan hæmme aktiveringen af renal RAS hos DN-rotter, reducere tabet af podocytporemembranprotein og cytoskeletalt protein og forsinke udviklingen af DN. Men der er i øjeblikket ingen forskning i det inflammatoriske respons af dette lægemiddel i DN-tilstand. I lyset af dette tager denne undersøgelse SD-rotter som forskningsobjekt for at observere virkningerne af traditionel kinesisk medicin til fjernelse af blodstasis og fremme af kollateraler på makrofaginfiltration, aktivering og TAK1/JNK-signalvej i nyrevæv hos DN-rotter, hvilket yderligere afklarer målene for traditionel kinesisk medicin til fjernelse af blodstasis og fremme af kollateraler og giver eksperimentelt grundlag for dets kliniske anvendelse.

Blandt 40 SD-rotter blev 10 rotter tilfældigt udvalgt som den normale gruppe (gruppe C), og de øvrige 30 rotter blev fodret med en enkelt intraperitoneal injektion af streptozotocin (STZ, 40 mg/kg) kombineret med en kost med højt sukker- og fedtindhold for at etablere diabetesmodeller. De succesfuldt modellerede rotter blev tilfældigt opdelt i en modelgruppe (M-gruppe) og en kinesisk urtemedicinsk gruppe (Z-gruppe). Gruppe Z fik behandling med traditionel kinesisk medicin. Efter 16 uger blev der udført 24-timers urinproteinkvantificering (24-timers UTP) i hver gruppe rotter; ELISA-metoden blev brugt til at påvise ekspressionen af monocyt kemoattraktivt protein-1 (MCP-1), interleukin-1 β (IL-1 β) og tumornekrosefaktor - α (TNF - α) i serum; Nyrevæv blev indsamlet, og immunofluorescens blev brugt til at påvise ekspressionen af makrofagmarkørprotein CD68 og klassisk aktiveret makrofagmarkørprotein inducerbar nitrogenoxidsyntase (iNOS). Western blot blev brugt til at påvise ekspressionen af TAK1/JNK-signalvejsrelaterede proteiner, herunder transformerende vækstfaktoraktiveret kinase-1 (TAK1), p-TAK1, c-Jun N-terminal kinase (JNK) og p-JNK.

I de senere år har traditionel kinesisk medicin fået en dybere forståelse af diabetisk nefropati, og de fleste læger argumenterer ud fra blodstase. Når man lider af tørst, fører Qi-mangel og manglende evne til at transportere blod til forsinket blodgennemstrømning, hvilket gradvist fører til blodstasis over tid; Yin-mangel og overdreven ild kan forårsage lidelse af kropsvæsker, hvilket resulterer i utilstrækkelige kropsvæsker og dårlig blodcirkulation. Over tid kan dette føre til blodstase. "Teorien om blodsyndromer: Blodstasis" siger: "Når der opstår blodstasis mellem meridianerne og organerne, er det den grundlæggende årsag til sygdommen." I "Essential Reading of the Medical School" står der: "Ophobningen af blodstase er retfærdighed, akkumuleret over tid, dag og nat." Hvis blodstasis varer ved og ikke heles, skyldes det meridian- og følgesygdomme. Forløbet af DN er langvarigt, så dets progression er i overensstemmelse med ændringerne i traditionel kinesisk medicin, såsom aggregering og dannelse, akkumulering over tid og stasis og obstruktion af kollateraler. Princippet om "blodstase, der obstruerer kollateraler" løber gennem DN fra start til slut og er dens grundlæggende patogenese. Metoden til at fremme blodcirkulationen, fjerne blodstasis og fjerne blokering af kollateraler er blevet det grundlæggende behandlingsprincip for DN. Denne blodstase er imidlertid vanskelig at opløse på grund af dens ophobning, som er uden for rækkevidde af konventionelle blodaktiverende og stasefjernende lægemidler. Derfor tilføjede vores forskningsgruppe igler, regnorme, skorpioner og andre specialiserede lægemidler til at uddybe meridianerne og fjerne parasitter på grundlag af brugen af konventionelle blodaktiverende og stasefjernende lægemidler som Danshen og Chuanxiong. Danshen er et vigtigt lægemiddel til at fremme blodcirkulationen og fjerne blodstasis, og dets vigtigste aktive ingredienser er salvianoliske syrer og tanshinoner. Moderne farmakologiske undersøgelser har vist, at Danshen kan regulere glukose- og lipidmetabolismen hos DN-patienter og forsøgsdyr, hæmme oxidativ stress, inflammation og fibrose og beskytte nyrefunktionen. Chuanxiong har den effekt, at det fremmer blodcirkulationen og qi-cirkulationen. De vigtigste aktive ingredienser er ligustrazin og ferulinsyre. Moderne farmakologiske undersøgelser har vist, at Chuanxiong har forskellige biologiske aktiviteter, såsom hæmning af blodpladeaggregering og trombose, reduktion af blodets viskositet, nedsat mesangialcelleproliferation og hæmning af endotelcelleproliferation. Effekten af igler er at bryde blod, fjerne blodstasis og fremme menstruation. Den vigtigste aktive ingrediens i igler er hirudin, som har antikoagulerende, antitrombotiske, lipidsænkende, antiinflammatoriske virkninger, hæmning af epithelial mesenchymal transition, reduktion af apoptose af renale tubulære epithelceller og lindring af renal fibrose. Regnorme fremmer blodcirkulationen og diurese ved behandling af nyresygdomme. Lumbricus indeholder regnormekinase, som forbedrer ubalancen i det fibrinolytiske system, hæmmer blodpladeaktivering, regulerer forstyrrelser i lipidmetabolismen og hæmmer spredning af glomerulære mesangialceller og overdreven ophobning af ekstracellulær matrix. Skorpionen har den virkning, at den fordriver vind, frigør meridianer og opløser knuder. Moderne farmakologiske undersøgelser har vist, at skorpioner kan virke antikoagulerende, antitrombotisk, fremme fibrinolyse, øge blodgennemstrømningen i nyrerne og reducere proteinuri. Kombinationen af disse fem urter kan fjerne blokeringen af meridianerne og eliminere blodstasis.

Nylige undersøgelser har vist, at makrofaginfiltration er en af de karakteristiske manifestationer af DN's inflammatoriske respons. Makrofaginfiltration blev fundet hos både DN-patienter og DN-dyremodeller, og graden af infiltration var positivt korreleret med DN-proteinuri og nyredysfunktion. Forskning har vist, at den vigtigste faktor, der bestemmer retningen for udvikling af nyresygdom, ikke er mængden af makrofaginfiltration, men snarere makrofagernes aktiveringsstatus i det lokale væv. Efter en nyreskade vandrer monocytter i blodet ind i nyrevævet og differentieres til makrofager. Makrofager får to forskellige aktiveringsfænotyper i et specifikt mikromiljø, nemlig klassisk aktiverede makrofager (M1) og ikke-klassisk aktiverede makrofager (M2). M1-makrofager medierer nyrebetændelse og fibrose ved at udskille iNOS, kemokiner (MCP-1, IL-8) og proinflammatoriske faktorer (TNF - α, IL-1 β); M2 producerer antiinflammatoriske faktorer som IL-1 og IL-10, som har antiinflammatoriske og vævsreparerende funktioner. INOS er en markør for aktivering af M1-makrofager. I det tidlige stadium af nyreskade infiltrerer M1-makrofager hovedsageligt og frigiver inflammatoriske faktorer som MCP-1, IL-1 β, TNF - α, ROS osv., hvilket inducerer og forbedrer den inflammatoriske respons. I denne undersøgelse viste modelgruppen af rotter sammenlignet med den normale gruppe en stigning i aggregeringen af CD68-positive makrofager i nyrevæv, en stigning i udtrykket af M1-makrofagaktiveringsmarkøren iNOS og en stigning i niveauerne af inflammatoriske faktorer som MCP-1, IL-1 β, TNF - α. Kinesisk urtemedicin til fjernelse af blodstasis og fremme af blodcirkulationen kan hæmme infiltration, aktivering og frigivelse af inflammatoriske faktorer i nyremakrofager hos DN-rotter og derved reducere nyrebetændelse.

Infiltration og aktivering af makrofager i DN-nyrevæv er tæt forbundet med TAK1/JNK-signalvejen. JNK tilhører den mitogenaktiverede proteinkinasefamilie (MAPK). Hver MAPK-familie består af et sæt af tre kinaser, der virker i rækkefølge: MAPKK-kinase (MAPKKK), MAPK-kinase (MAPKK) og MAPK. Aktiveret MAPKKK kan fosforylere MAPKK og aktivere den. Aktiveret MAPKK fosforylerer MAPK og aktiverer den. Aktiveret MAPK kan translokeres ind i kernen for at regulere transkriptionen af målgener. I de senere år har dyre- og celleforsøg bekræftet, at JNK-stien fremmer nyrernes inflammatoriske respons. TAK1 er en serin/threoninkinase, der tilhører MAPKKK-familien, placeret opstrøms for JNK og er et vigtigt signalmolekyle i JNK-signaltransduktionen. Aktivering af TAK1/JNK-signalvejen kan observeres i nyresygdomme som DN, IgA-nefropati og nyretransplantation med iskæmi/reperfusion og er tæt forbundet med udviklingen af den inflammatoriske respons. I UUO-mus kan hæmning af TAK1/JNK-signalvejen reducere makrofaginfiltration, hæmme M1-makrofagaktivering og lavere niveauer af inflammatoriske faktorer. I denne undersøgelse blev TAK1/JNK-signalvejen sammenlignet med den normale gruppe signifikant aktiveret hos DN-rotter. Kinesisk urtemedicin til fjernelse af blodstasis og fremme af blodcirkulationen kan reducere udtrykket af TAK1/JNK-signalvejsrelaterede proteiner betydeligt og hæmme aktiveringen af TAK1/JNK-signalvejen.

Sammenfattende indikerer vores forskningsresultater, at traditionel kinesisk medicin til fjernelse af blodstasis og fremme af blodcirkulationen kan forbedre proteinuri og lindre nyrebetændelse hos DN-rotter. Virkningsmekanismen kan være relateret til dens hæmning af TAK1/JNK-signalvejsmedieret makrofaginfiltration, aktivering og frigivelse af inflammatoriske faktorer.