Kvalitetsevaluering af Dengzhanhua-standardafkog baseret på fingeraftryksatlas og in vitro-antioxidantaktivitetstest
Dengzhan Hua, også kendt som Dengzhan Xixin, er en plante i Asteraceae-familien kaldet Erigeron breviscapus (Vant.) Hand-Mazz. Den tørrede hele plante høstes om foråret og efteråret og er medtaget i 2020-udgaven af den kinesiske farmakopé. Den virker ved at fremme blodcirkulationen, fjerne blokeringer i blodårerne, lindre smerter, fjerne vind og kulde. Moderne farmakologiske undersøgelser har vist, at Scutellaria baicalensis har neuroprotektive, kardiovaskulære og cerebrovaskulære beskyttende, antioxidante, anticancer og andre farmakologiske virkninger. Kræft, hjerte-kar-sygdomme og cerebrovaskulære sygdomme er tæt forbundet med oxidative skader forårsaget af for mange reaktive iltarter som f.eks. superoxidanionradikaler, hydroxylradikaler og lipidradikaler i kroppen. Hvis man indtager antioxidanter på den rigtige måde, kan man eliminere for mange frie radikaler i kroppen, hvilket er gavnligt for menneskers sundhed og for forebyggelse og kontrol af sygdomme. Litteraturen viser, at Lamplighter har en fremragende antioxidantaktivitet. Den kemiske sammensætning af Lamplighter er kompleks, og forholdet mellem kemisk sammensætning og aktiv doseringseffekt er endnu ikke helt klart. Det kemiske fingeraftryk af traditionel kinesisk medicin er blevet brugt i vid udstrækning til kvalitetsevaluering af kinesisk medicin på grund af dets evne til at karakterisere stofkomponenterne i kinesisk medicin, hvilket er i overensstemmelse med den overordnede og uklare karakter af traditionel kinesisk medicinteori. Anvendelsen er dog i stigende grad begrænset, da den kun afspejler den kemiske information om traditionel kinesisk medicin og ikke etablerer et forhold til dens terapeutiske virkninger. I 2020 udstedte Drug Evaluation Center of the National Medical Products Administration "Technical Guidelines for the Detection of Biological Effects of Traditional Chinese Medicine (Trial)" og anbefalede etablering af kvalitetskontrolmetoder relateret til aktivitet for at sikre sikkerheden og effektiviteten af traditionel kinesisk medicin i kliniske anvendelser. Undersøgelsen af "spektrum-effekt-forholdet" i traditionel kinesisk medicin kan nøje forbinde det overordnede karakteristiske udtryk for aktive ingredienser med virkningerne af flere indikatorer og mål og kan med rimelighed bestemme det farmakologiske stofgrundlag, hvilket også er i overensstemmelse med egenskaberne ved traditionel kinesisk medicin.

Standardafkog af kinesisk medicin er et enkelt afkog af traditionel kinesisk medicin fremstillet ved hjælp af standardiserede processer, der bruges til standardiseret klinisk medicinering, hvilket sikrer nøjagtigheden af medicineringen og konsistensen af målingen. Det fungerer som en standardreference til måling af, om kinesiske medicinformelpartikler grundlæggende er i overensstemmelse med klinisk afkog. Forslaget om standardafkog giver et materielt benchmark for at opnå kvalitetskonsistens af doseringsformer baseret på afkog af traditionel kinesisk medicin og etablere effektive kvalitetsevalueringsmetoder. Denne artikel tager standardafkoget af Dianzhanhua som forskningsobjekt og verificerer dets antioxidanteffekt gennem in vitro-eksperimenter med rensning af frie DPPH- og ABTS-radikaler. Samtidig etableres dets HPLC-fingeraftryk, og det samlede flavonoidindhold bestemmes; Ved hjælp af bivariat korrelationsanalyse til at screene for signifikant korrelerede antioxidantkomponenter blev klyngeanalyse (CA) og hovedkomponentanalyse (PCA) udført på de screenede komponenter, og ortogonal partiel mindste kvadraters diskriminantanalyse (OPLS-DA) blev yderligere brugt til at identificere differentierede komponenter; Evaluer kvaliteten af dets antioxidanteffekt for at give et grundlag for kvalitetskontrol af Lamplighter og dets præparater.

 

 

DPPH- og ABTS-radikaler bruges ofte som indikatorer til at måle in vitro-antioxidantaktiviteten af aktive ingredienser. DPPH-metoden bestemmer lægemidlers antioxidantkapacitet ved at binde sig til stoffer med lone pair-elektroner, mens ABTS-metoden bestemmer antioxidantkapaciteten ved at binde sig til hydrofile og lipofile stoffer. De vigtigste aktive ingredienser i Scutellaria baicalensis omfatter flavonoider. I denne undersøgelse blev det samlede flavonoidindhold i 16 partier af Scutellaria baicalensis standardafkog bestemt til at være 2,85-11,28 mg/ml. Dens in vitro-antioxidantaktivitet blev evalueret ved at fjerne frie DPPH- og ABTS-radikaler som antioxidantindikatorer. IC50-værdien for DPPH var 1,00-3,39 mg/ml, og IC50-værdien for ABTS var 0,254-2,16 mg/ml, hvilket indikerer, at evnen hos Scutellaria baicalensis standardafkog til at fjerne ABTS-frie radikaler er stærkere end evnen til at fjerne DPPH-frie radikaler. Ved hjælp af Pearsons bivariate korrelationsanalyse blev det konstateret, at de to in vitro-antioxidantaktiviteter (IC50-værdier) var signifikant negativt korreleret med det samlede flavonoidindhold (P<0,01) med korrelationskoefficienter på henholdsvis -0,714 og -0,841, hvilket indikerer, at jo mindre IC50-værdien er, og jo højere det samlede flavonoidindhold er, desto stærkere er ekstraktets antioxidantkapacitet. Derfor er indholdet af totale flavonoider en af de indikatorer, der påvirker antioxidantstyrken af Scutellaria baicalensis, og kan bruges som en indikator til at evaluere antioxidantstyrken af Scutellaria baicalensis.
I processen med at etablere fingeraftryksspektre blev Agilent ZORBAX-SB C18, Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 og Agilent Extend C18-kromatografiske søjler undersøgt eksperimentelt. Baseret på sammenligningen af antallet af kromatografiske toppe og separationsgraden blev det fundet, at Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 havde bedre ydeevne; Vi undersøgte forskellige flowhastigheder (0,8, 1, 1,2 mL/min) og fandt ud af, at 0.8 mL/min havde en bedre separationseffekt; Vi undersøgte de binære systemer af 0,1% myresyre vand methanol, 0,1% myresyre vand acetonitril og 0,1% myresyre vand acetonitril tetrahydrofuran med forskellige gradienter. Det blev konstateret, at separationseffekten af 0,1% myresyre vand acetonitril tetrahydrofuran var bedre, og basislinjen var relativt stabil; Screening af detektionsbølgelængden på 200-400 nm viste resultaterne, at de kromatografiske toppe, der blev opnået ved at ændre bølgelængden i forskellige tidsperioder, var flere, og basislinjen var stabil. Endelig blev det bestemt, at bølgelængden var 252 nm fra 0-9 minutter og 330 nm fra 9-60 minutter.
I de senere år har litteratur om fingeraftryksspektre af lægeurter som Scutellaria baicalensis for det meste brugt HPLC-metoden, som evaluerer ligheden mellem fingeraftryksspektrene og bestemmer de fælles toppe; Litteraturen brugte CA og PCA til kemisk mønstergenkendelse af fingeraftryksspektre og klassificerede medicinske materialer, men foretog ikke en dybtgående analyse af årsagerne til forskelle. På grundlag af fingeraftryksspektret af lægeurten Lampyridis i den tidlige fase af denne artikel blev der etableret et fingeraftryksspektrum af standardafkoget af Lampyridis med en lighed på 0,770-0,993, og der blev opnået 21 fælles toppe. Otte kendte komponenter blev identificeret ved hjælp af referencestoffet. Denne undersøgelse brugte bivariat korrelationsanalyse til at screene 10 kromatografiske toppe, nemlig top 3, 4 og 6 (chlorogensyre), top 7, 11 og 13 (scutellarin B), top 14 (isochlorogensyre B), top 15 (scutellarin A) og top 17 og 19 (isochlorogensyre C), som var signifikant negativt korreleret med evnen til at opfange frie DPPH-radikaler (dvs. jo større det fælles topområde er, jo mindre er IC50-værdien). Person-korrelationskoefficienterne var -0,552, -0,733, -0,626 og -0, henholdsvis 665, -0,537, -0,518, -0,767, -0,754, -0,541 og -0,748, hvilket indikerer, at de tilsvarende kemiske stoffer er de vigtigste aktive ingredienser i opfangning af DPPH-radikaler. Tretten kromatografiske toppe, herunder top 3, 4, 6, 7, 8, 11, 13, 14, 15, 16, 17, 18 (isochlorogen syre A) og 19, var signifikant negativt korreleret med ABTS-fri radikalopfangning. Person-korrelationskoefficienterne var henholdsvis -0,594, -0,861, -0,761, -0,829, -0,645, -0,583, -0,676, -0,721, -0,740, 0,574, -0,652, -0,720 og -0,518. De tilsvarende stoffer var de vigtigste aktive ingredienser for ABTS-fri radikalopfangning. Antioxidantaktiviteten (IC50-værdier) bestemt ved to antioxidantmetoder var signifikant korreleret med de kendte komponenter klorogensyre, scutellarin B, isoklorogensyre B, scutellarin A og klorogensyre C, hvilket indikerer, at disse fem komponenter er de vigtigste aktive stoffer i scutellarins antioxidantaktivitet.
Forsøget brugte 10 fælles toppe, der var signifikant korreleret med DPPH og det samlede flavonoidindhold som variabler, og 13 fælles toppe, der var signifikant korreleret med ABTS og det samlede flavonoidindhold som variabler til henholdsvis CA- og PCA-analyse. Prøverne blev inddelt i to kategorier, nemlig vilde S014 og S016, og de resterende 14 partier af plantede prøver. Det spekuleres i, at det kan være relateret til faktorer som vækstmiljøet (lys, højde, breddegrad og længdegrad osv.) og høstperioden for lanterneblomsterne. Samtidig blev der etableret en scoringsmodel for standardafkoget af Scutellaria baicalensis med disse komponenter som variabler. Rangordningen af scorer for de 16 partier af standardafkog var stort set i overensstemmelse med rangordningen af in vitro-antioxidantaktivitet. På baggrund af CA og PCA udførte forfatteren yderligere en OPLS-DA-analyse og identificerede fire primære differentierede komponenter relateret til rensning af DPPH-frie radikaler: top 11, 15 (scutellarin), 14 (isochlorogen syre B) og top 13 (scutellarin); De fire primære differentierede komponenter relateret til fjernelse af ABTS-frie radikaler er top 11, 15, 14 og top 8 (scutellarin). Forskningsresultaterne tyder på, at når man kontrollerer kvaliteten af Scutellaria baicalensis, bør man ud over at kontrollere det høje indhold af Scutellaria baicalensis B (dvs. baicalin) også tilføje andre kvalitetskontrolindikatorer med stærk farmakologisk aktivitet.
Sammenfattende kombinerer denne undersøgelse kemisk fingeraftryk med evaluering af biologisk aktivitet og udforsker de antioxidantaktive ingredienser i standardafkoget af Lampyridis gennem spektral korrelationsforskning. Den etablerede metode er nem at bruge, og resultaterne er pålidelige, hvilket kan danne grundlag for yderligere forskning i de farmakologiske virkninger og kvalitetsevaluering af Lampyridis. I fremtiden kan prøvestørrelsen øges, og væskekromatografi-massespektrometri-teknologi kan bruges til at identificere de fælles toppe af ukendte komponenter i standardafkoget, studere deres farmakologiske aktiviteter og grundigt undersøge spektrum-effekt-forholdet mellem flere farmakologiske aktiviteter, hvilket giver et grundlag for kvalitetsforskningen af Scutellaria baicalensis.