Sammenlignende undersøgelse af UPLC-karakteristiske spektre og indhold af multi-indeks-komponenter i forskellige specifikationer af Qingpi-medicinske materialer
Qingpi blev første gang omtalt i bogen "Pearl Sac". Li Shizhen sagde: "Qingju-skal var ubrugelig i oldtiden, men det var først under Song-dynastiet, at medicinske eksperter begyndte at bruge den." Det var først i Song-dynastiet, at umodne og modne appelsinskaller blev sammenlignet og viste sig at have lidt forskellige medicinske virkninger, og derfor skelnes der mellem Qingju-skaller og Huangju-skaller. Qingpi refererer til den tørrede eller umodne frugtskal af Citrus reticulata Blanco og dens dyrkede sorter i Rutaceae-familien. Der er to forskellige specifikationer for Qingpi, der bruges i medicin: indsamling af unge frugter, der falder ned fra jorden mellem maj og juni, tørring af dem i solen og almindeligvis kendt som "Geqingpi"; høst af umodne frugter fra juli til august, opskæring af dem på langs i fire kronblade fra huden til bunden, fjernelse af alle kronblade og tørring af dem i solen, almindeligvis kendt som "Four Flower Green Skin". Grønt skind er varmt af natur og har en bitter og skarp smag. Den vender tilbage til lever-, galdeblære- og mave-meridianerne. Den virker beroligende på leveren og nedbryder qi, reducerer ophobning og opløser stagnation. Den bruges til bryst- og ribbensmerter, broksmerter, brystfetich, brystbyld, ophobning af mad og qi-stagnation samt udspilet mave og mavesmerter. Hovedkomponenterne i Qingpi er flygtige olier, flavonoider, aminosyrer osv. Moderne farmakologiske undersøgelser har vist, at Qingpi virker regulerende på mave-tarmkanalen, fremmer galdestrømmen, har antiarytmiske virkninger, slimløsende virkninger og behandler mastitis. De to specifikationer for grøn hud har lidt forskellige funktionelle indikationer. Den ene type grøn hud fokuserer primært på at bryde qi-stagnation, mens den anden type fokuserer på at regulere lever og qi.
Derudover har de to også små forskelle i deres sammensætning. 2020-udgaven af den kinesiske farmakopé har lavet forskellige regler for karakteristika og identifikation af forskellige specifikationer for grøn skræl, og indholdsbestemmelseselementerne har kun grænsekrav for hesperidin. Forskningsresultaterne fra Li et al. viste, at indholdet af hesperidin og sinomenin i Geqingpi var højere end i Sihuaqingpi, mens indholdet af N-methylamin og flygtig olie var lavere. Tendensen med højt og lavt indhold af de fire komponenter i to specifikationer fra forskellige regioner var stort set den samme. Zhao et al. brugte GC-MS til at analysere de flygtige olier fra Eucommia ulmoides og Eucommia ulmoides og fandt ud af, at ni forbindelser, herunder geraniol, nerolidol og α-isoterpinen, var unikke for Eucommia ulmoides. Hovedkomponenterne, limonen og linalool, var mere end dobbelt så store som i Eucommia ulmoides, mens indholdet af andre komponenter varierede meget. Yi et al. påpegede også, at der er visse forskelle i sammensætningen af Geqingpi og Sihuaqingpi ved at bruge gaskromatografi og væskekromatografi til at undersøge deres komponenter. Ovenstående undersøgelser viser alle, at der er forskelle i den kemiske sammensætning mellem Geqingpi og Sihuaqingpi.
Denne undersøgelse etablerede ultrahøjtydende væskekromatografi (UPLC) karakteristiske spektre af Qingpi og Sihua Qingpi, kombineret med kemometriske metoder, for at sammenligne forskellene mellem de to specifikationer for Qingpi og sammenligne indholdet af fem effektive ingredienser i de to specifikationer for Qingpi-lægemidler, hvilket giver reference til forbedring af mængdestandarderne for Qingpi i de to specifikationer.

 

Forberedelse af testopløsning. Denne undersøgelse anvendte enkeltfaktoranalyse til at evaluere virkningerne af ekstraktionsopløsningsmidler (methanol, 70% methanol, 50% methanol, ethanol, 70% ethanol, 50% ethanol), ekstraktionsmetoder (ultralydsekstraktion, opvarmning af tilbagesvaling) og ekstraktionstider (15, 30, 45 minutter) på de karakteristiske spektre og indholdsbestemmelsen af hver komponent med den kromatografiske top "samlet topareal/prøvestørrelse" og indholdet af sinomenin, hesperidin, naringin og hesperidin som evalueringsindikatorer. Resultaterne viste, at opvarmning under tilbagesvaling med 70%-methanol i 30 minutter havde den bedste effekt.
Etablering og analyse af funktionskort. Resultaterne af feature map-undersøgelsen viste, at der var 7 fælles toppe i UPLC feature maps for både Geqingpi og Sihuaqingpi. Fem karakteristiske komponenter i Geqingpi og Sihuaqingpi blev identificeret ved hjælp af referencestandarder, nemlig sinomenin, naringin, hesperidin, naringin og hesperidin. Vi undersøgte forskellige vandige faser (0,1% fosforsyre og 0,1% myresyre), to forskellige typer kromatografiske søjler Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μ m), YMC Triart C18 (100 mm × 2,1 mm, 1.9 μ m), og sammenlignede virkningerne af forskellige detektionsbølgelængder (275 nm og 284 nm), søjletemperaturer (38, 40, 42 °C) og flowhastigheder (0,28, 0,30, 0,32 ml/min) på de kromatografiske toppe af Qingpi-karakteristiske spektre. Resultaterne viste, at ved anvendelse af Waters ACQUITY HSS T3 (100 mm × 2,1 mm, 1,8 μ m) kromatografisk søjle med 0,1% myresyre som den vandige fase under de kromatografiske betingelser for 275 nm detektionsbølgelængde, søjletemperatur på 40 ℃ og strømningshastighed på 0,30 ml / min, blev de kromatografiske toppe opnået. Adskillelsesgraden er god, basislinjen er stabil, antallet af kromatografiske toppe er højt, og signalet er tilsvarende højt.
Forskellen i kemisk sammensætning mellem Geqingpi og Sihuaqingpi. De karakteristiske UPLC-spektre for forskellige specifikationer af Qingpi-medicinske materialer, der blev etableret i denne undersøgelse, identificerede 7 fælles toppe i både Geqingpi og Sihuaqingpi, hvoraf 5 karakteristiske toppe blev identificeret. Peak 1 blev bestemt til at være sinomenin; Peak 3 er Yunxiang pomelo peel glycosid; Peak 4 er hesperidin; Peak 6 er Chenpi-ekstrakt; Peak 7 er appelsinskalsekstrakt. I denne undersøgelse blev HCA, PCA og OPLS-DA brugt til at klassificere forskellige specifikationer af medicinske materialer med grøn skræl i to kategorier; Yderligere analyse afslører, at de kemiske komponenter, der er repræsenteret af top 1, 4 og 2, er de forskellige komponenter mellem disse to specifikationer af Qingpi-medicinske urter. Derfor kan disse tre komponenter bruges som indgangspunkter til yderligere analyse for at skelne mellem disse to specifikationer af Qingpi-medicinske urter.
Flavonoider er de vigtigste aktive ingredienser i Qingpi. Resultaterne af indholdsbestemmelsen af fem kendte flavonoider i Geqingpi og Sihuaqingpi viste, at indholdet af sinomenin og hesperidin i Geqingpi var højere end i Sihuaqingpi, mens indholdet af naringin og hesperidin i Geqingpi var lavere end i Sihuaqingpi. Samlet set var indholdet af naringin i de to specifikationer af Qingpi Yunxiangyupi relativt ens. En uafhængig t-testanalyse viste, at forskellene i sinomenin, hesperidin og naringin var statistisk signifikante. Dette resultat er i overensstemmelse med forskningsresultaterne fra Li et al. Ud over de flavonoider, der blev undersøgt i dette eksperiment, er flygtig olie også en af de effektive komponenter i Qingpi-medicinske urter. Zhaos forskning i de flygtige olier fra Geqingpi og Sihuaqingpi viste, at ni forbindelser, herunder geraniol, nerolidol og α-isoterpinen, er unikke for Geqingpi. Hovedkomponenterne, limonen og linalool, er mere end dobbelt så høje som i Sihuaqingpi. Ved klinisk anvendelse er de funktionelle indikationer for Four Flower Green Skin mildere end for Geqing Skin, hvilket kan hænge sammen med det lavere indhold af aktive ingredienser som hesperidin og sinomenin samt flygtig olie i Four Flower Green Skin sammenlignet med Geqing Skin. Ifølge relevant litteratur er Geqingpi en ung frugt, der indsamles fra maj til juni; Four flower green skin høstes fra umodne frugter i juli til august, og forskellen mellem de to ligger i høsttidspunktet og modenhedsstadiet. Ud fra ovenstående resultater kan man se, at forskellige vækst- og udviklingsstadier kan påvirke ophobningen af aktive ingredienser i Qingpi. I løbet af reproduktions- og udviklingsperioden viser de aktive ingredienser i Qingpi dog ikke blot en stigende eller faldende tendens, men snarere en vis stigning og et vist fald: Chenpi-ekstrakt og hesperidin viser en stigende tendens; Simulin, hesperidin og naringin viste en faldende tendens. Om forskellene i disse indhold direkte eller indirekte fører til forskellige effektivitetsfokus for forskellige specifikationer af Qingpi, kræver yderligere farmakologiske eksperimenter for at bevise. Baseret på forskellen i indholdet af de fem aktive ingredienser i to forskellige specifikationer af Qingpi, kombineret med den forskellige vægtning af de to effekter, kan vi bedre implementere den traditionelle kinesiske medicins syndromdifferentiering og behandling og forbedre behandlingens effektivitet, hvis recepten er separat mærket til brug i kliniske applikationer. I mellemtiden, hvis de nuværende farmakopéstandarder kan etablere separate kvalitetsstandarder for Geqingpi og Sihuaqingpi, kan det være mere befordrende for kvalitetskontrollen af Qingpi-medicinske materialer.