Kvalitetsanalyse af roser baseret på UPLC-fingeraftryk og bestemmelse af to kemiske komponenter
Rosenblomst er den tørrede blomst af Rosa chinensis Jacq., en plante i Rosaceae-familien. Den er også kendt som rosenrød, sejrrig sne, slank gæst, kæmpende snerød, fire sæsoners blomst, dyrebar måneblomst og lyst snefnug og er kendt som blomsternes dronning. Rosenblomster blev første gang optaget i Compendium of Materia Medica. De har en sød smag, en varm natur og hører til levermeridianen. De fremmer blodcirkulationen, regulerer menstruationen, beroliger leveren og lindrer depression. De kan bruges til at behandle menstruationsforstyrrelser, dysmenoré og amenoré; blodstase, hævelse og smerte, forbrændinger, skader fra fald, bylder og scrofula. Den plantes over hele landet, hovedsageligt i Yunnan, Hubei, Sichuan og Gansu, og kan høstes hele året. Rosens kemiske sammensætning er rig og varieret, herunder flavonoider, tanniner, fenoliske syrer, flygtige olier, pigmenter og glykosidforbindelser.
I de senere år har forskningen i roser gjort visse fremskridt. Wu et al. brugte UPLC-Q-Tof-MS-teknologi til at undersøge forskellene i ikke-flygtige kemiske komponenter mellem roser og roser. Resultaterne viste, at der blev fundet 43 forbindelser i roser og 25 forbindelser i roser. De vigtigste komponenter, der blev fundet i roser, var fenoliske glykosider, tanniner og fosfolipider, og den eneste flavonoidkomponent, der blev fundet, var kaempferolglukosid. Ifølge litteraturforskningsrapporter er flavonoider de vigtigste aktive komponenter i rosenblomster. Shangguan et al. undersøgte rosenblomster på forskellige høsttidspunkter, målte det samlede indhold af flavonoider i rosenblomster på forskellige høsttidspunkter og vurderede deres antioxidantaktivitet baseret på deres evne til at fjerne DPPH- og hydroxylradikaler. De undersøgte sammenhængen mellem det samlede indhold af flavonoider og antioxidantaktiviteten, men undersøgte ikke det samlede indhold af flavonoider i rosenblomster fra forskellige oprindelser. På nuværende tidspunkt er der mange undersøgelser af roser, men der er kun få rapporter om kvalitetsstandarder for roser. Moderne farmakologisk forskning har vist, at hyperosid og isoquercitrin har antioxidantstress og celleapoptose, antiakut leverskade, antiinflammatorisk, antidepressiv, vaskulær beskyttelse og andre effekter, som er i overensstemmelse med effekten af at berolige leveren og lindre depression i roser. Dette indikerer, at hyperosid og isoquercitrin er en af de vigtigste aktive ingredienser i roser. Under indholdsbestemmelsen af rosenblomster i 2020-udgaven af den kinesiske farmakopé anvendes kun den isokratiske elueringsmetode til at begrænse den samlede mængde hyperosid og isoquercitrin. Under denne kromatografiske tilstand afspejles kun oplysningerne om hyperosid og isoquercitrin, men det kan ikke fuldt ud afspejle kvaliteten af rosenblomster. Oplysningerne om andre karakteristiske komponenter som flavonoider og fenoliske syrer kan ikke afspejles fuldt ud. Fingeraftryksspektret kan i høj grad afspejle de kemiske komponenter i traditionel kinesisk medicin og er blevet et vigtigt middel til omfattende kvalitetskontrol af traditionel kinesisk medicin. Baseret på dette etablerede dette eksperiment en UPLC-fingeraftryksmetode for rosenblomster og målte samtidig den samlede mængde af dens flavonoidkomponenter, hyperosid og isoquercitrin, under betingelserne for fingeraftryk for at opnå kvalitativ og kvantitativ kontrol af rosenblomster udelukkende ved hjælp af fingeraftryksmetoder. Klyngeanalyse og hovedkomponentanalyse blev kombineret for at evaluere rosenblomster fra forskellige oprindelser, hvilket lagde grunden til forskning i kvalitetskontrol af rosenblomster. Derudover kan denne metode også anvendes til kvalitetsstandarder for roser i samme familie og slægt og kan anvendes til identifikationsforskning af roser og roser.

 

Bestemmelse af forberedelsesmetode og kromatografiske betingelser for testprøven. Dette eksperiment undersøgte ekstraktionsopløsningsmidlet, ekstraktionsmetoden, ekstraktionstiden og forholdet mellem fast stof og væske. Den kromatografiske metode blev brugt til at maksimere informationsindholdet, opnå den bedste ekstraktionseffektivitet og sikre metodens stabilitet. Endelig blev 50% methanol brugt som ekstraktionsopløsningsmiddel efterfulgt af 30 minutters ultralydsbehandling og et faststof-væske-forhold på 1,0 g: 50 ml som prøveforberedelsesmetode. Med hensyn til kromatografiske forhold blev forskellige kromatografiske søjler, mobile fasesystemer, søjletemperaturer, strømningshastigheder og detektionsbølgelængder undersøgt. Efter sammenligning blev det konstateret, at valg af Agilent SB C18 som den kromatografiske søjle, acetonitril 0,2% fosforsyre som den mobile fase, søjletemperatur på 35 ℃, strømningshastighed på 0,4 ml / min, topformen og separationsgraden af de kromatografiske toppe var god; Testopløsningen blev scannet ved fuld bølgelængde under UV-synligt lys ved 190-400 nm, og resultaterne viste, at de fælles toppe i fingeraftryksspektret ved 254 nm havde høje responsværdier og gode topformer. Desuden blev den maksimale absorption af hyperosid og isoquercitrin observeret ved 254 nm, så 254 nm blev valgt som detektionsbølgelængde.
Analyse af fingeraftryksspektrum og resultater af indholdsbestemmelse. Denne undersøgelse brugte "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (2012-version) til at foretage en lighedsanalyse af fingeraftryksspektrene fra 15 partier rosenblomster. Der blev fundet i alt 30 fælles toppe, og ligheden mellem fingeraftryksspektrene for de 15 partier af prøver var større end 0,95, hvilket tyder på konsistens i den kemiske sammensætning af rosenblomster fra forskellige partier. I alt 10 karakteristiske toppe blev identificeret ved sammenligning med referencestandarder, hvoraf 8 var flavonoider. Ved hjælp af klyngeanalyse og hovedkomponentanalyse til at analysere fingeraftryksspektrene af roser fra forskellige oprindelser, når klyngeafstanden er 10, kan roser fra forskellige partier opdeles i 5 kategorier, hvilket indikerer, at roser fra forskellige oprindelser har visse forskelle. PCA-analyse viser, at der er visse forskelle i kvaliteten af roser fra forskellige regioner. Ved at måle indholdet af hyperosid og isoquercitrin i 15 partier af rosenblomster var det samlede indhold af hyperosid og isoquercitrin 3,88-8,67 mg/g, hvilket var højere end farmakopéens værdi på 0,38%. Dette indikerer, at alle 15 partier rosenblomster er kvalificerede medicinske materialer med det højeste samlede indhold af hyperosid og isoquercitrin i Zhoukou City, Henan-provinsen.
Den etablerede fingeraftryksmetode kan anvendes til kvalitetsevaluering af roser. Fingeraftryksspektrene fra 15 partier af rosenmedicinske materialer blev analyseret ved hjælp af "Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation Software" (2012-version), og i alt 22 fælles toppe blev identificeret. Ligheden mellem fingeraftryksspektrene for 15 partier af rosenmedicinske materialer var større end 0,95. Rose og rosen er begge medlemmer af Rosaceae-familien og kan skelnes fra hinanden med hensyn til deres morfologiske, mikroskopiske og fysisk-kemiske egenskaber. Der har dog ikke været nogen rapporter om fingeraftryksidentifikation. Det UPLC-fingeraftryk, der blev etableret i denne undersøgelse, kan bruges til identifikation af rose og rose. Fra sammenligningen af fingeraftryksspektre kan det ses, at de to har 15 fælles komponenter, hvor rose har 10 eksklusive komponenter, og rose har 5 eksklusive komponenter.
På grundlag af etablering af UPLC-fingeraftryk af rosenblomster identificerede denne undersøgelse flere flavonoide komponenter og evaluerede dem ved hjælp af kemisk mønstergenkendelsesmetode; Etablering af en metode til bestemmelse af indholdet af hyperosid og isoquercitrin i roser, hvilket giver et grundlag for kvalitetskontrol af roser. Denne metode er enkel, nøjagtig og kan fungere som reference for efterfølgende forskning i roser.