Fremstillingsmetode og anvendelse af immobiliseret betulinsyre-affinitetsintegralkolonne
23-hydroxybetulinsyre (23-HBA) er en pentacyklisk triterpenoidforbindelse af lupintypen, der er isoleret fra den traditionelle kinesiske medicinplante Pulsatilla chinensis i Ranunculaceae-familien. Det findes også i forskellige planter som Betula pubescens, Ziziphus mauritiana, Prunella vulgaris, Apocynaceae, og er især udbredt i Betula-familien. Moderne farmakologisk forskning har vist, at det har en række virkninger såsom antiviral, hæmning af tumorcelleproliferation, hæmning af angiogenese og kombineret sensibilisering. For eksempel har denne type forbindelse en unik virkningsmekanisme, ekstremt lav toksicitet og minimale bivirkninger, hvilket gør det til en meget lovende kandidatforbindelse til anti-HIV-1-terapi; For eksempel kan mange derivater af 23-HBA også hæmme den biologiske aktivitet af forskellige tumorer og kræftceller, såsom endetarmskræft, lungekræft, leukæmi, lymfom, prostatacancer, ovariecancer osv. ved at hæmme specifikke enzymer, der er nødvendige for celleoverlevelse og vækst, såsom ornithindecarboxylase. Derfor betragtes 23-HBA som en førende forbindelse med betydelig forskningsværdi.
I de senere år har vores forskningsgruppe gennemført systematiske undersøgelser af derivatiseringen af 23-HBA og opnået det vigtige derivat 3,23-diacetyl-17-eddikesyre-betulinsyre (i det følgende benævnt Derived BA) af 23-HBA med bedre aktivitet. Forskningen i virkningsmekanismen for sådanne 23-HBA-derivater er dog stadig i sin vorden, og der er kun få rapporter om deres mål, der står over for dilemmaet med uklare mål og mekanismer. Derfor har udviklingen af en effektiv, hurtig og enkel metode til at identificere og identificere protein-/enzymmål for naturlige produkter et meget bredt og vigtigt anvendelsesperspektiv. Det er værd at bemærke, at der i de senere år har været forskellige teknologiske midler til opdagelse og forskning af lægemiddelmålproteiner; Blandt dem kan den kemiske proteomikteknologi baseret på affinitetsberigelsesfiskeri udnytte eller simulere de specifikke interaktioner mellem biomolekyler og tjene som en stationær fase til kromatografi til selektivt at analysere og rense specifikke stoffer fra komplekse blandinger. Derfor er det blevet en af de vigtigste metoder til at studere proteinmål for små molekyler med betydelige fordele såsom høj kapacitet og lave omkostninger. Indtil videre er affinitetskromatografi blevet anvendt med succes i søgningen efter målproteiner for forskellige lægemidler som tacrolimus, cyclosporin, methotrexat osv. Ved at forberede en ny affinitetskromatografikolonne bundet med 23-HBA-derivater undersøger vi affinitetsscreeningen af proteiner udvundet fra celler eller væv for at opdage tilsvarende målproteiner. Dette forventes at etablere nye ideer og metoder til søgning og undersøgelse af målproteiner af naturlige produkter; Samtidig giver det også en vigtig forskningsplatform til undersøgelse af interaktionen mellem små molekylære naturlige produkter og forskellige mål.
Blandt almindelige matrixmaterialer til affinitetsberigelse har silicagel god kromatografisk ydeevne, men dårlig syre- og alkalimodstand; Harpiks og agarose er velegnede til et bredt pH-område, men har dårlig mekanisk styrke. En monolitisk søjle er en stationær fase med kontinuerligt leje, der dannes ved in situ-polymerisation af en blanding af monomerer, tværbindingsmidler, initiatorer og poredannende midler i en kromatografisk søjle, der er egnet til hurtig analyse og flowhastighedsgradienttilstand. Sammenlignet med traditionelle pakkede søjler har den fordelene ved enkel forberedelsesmetode, nem modifikation, høj søjleeffektivitet, god permeabilitet, lavt modtryk og hurtig masseoverførselshastighed; Samtidig har den også fordelen ved kontrollerbar porestørrelse, hvilket har store fordele ved adskillelse og analyse af biomolekyler. Derfor har udviklingen af ny polymerbaseret masseaffinitetskromatografi baseret på syre- og alkaliresistens og god biokompatibilitet vigtig teoretisk og praktisk betydning.
Der findes i øjeblikket ingen litteraturrapporter om monolitiske søjler af organisk polymer bundet med 23-HBA-forbindelser. Denne undersøgelse brugte hovedsageligt "one pot-metoden", der blev rapporteret tidligere, til at forberede en ny immobiliseret 23 HBA-målpolymermonolitisk søjle poly (GMA-EDA-BA-co EDMA) ved in situ termisk polymerisering i en 100 μ m ID (indre diameter) kapillarsøjle; Samtidig undersøgte vi grundigt sammensætningen og forholdet mellem den forberedte monolitiske søjle og undersøgte dens virkningsmekanisme.

I denne artikel undersøges en metode til fremstilling af en affinitetskromatografikolonne til immobilisering af små molekyler af naturlige produkter. For det første syntetiseres EDA-BA-funktionelle monomerer (ligander) med aktive ethylendiamingrupper ved at ændre 28-positionen, hvilket ikke påvirker aktiviteten væsentligt. Poly (GMA-EDA-BA co EDMA) integrerede kromatografikolonner fremstilles ved hjælp af en "one pot-metode" med andre monomerer og tværbindingsmidler. Kernen i denne undersøgelse er at udvikle en metode til fremstilling af affinitetskromatografikolonner til immobilisering af små molekyler af naturlige produkter med salgsfremmende værdi. "One pot-metoden" har store fordele i forberedelseseffektivitet, ikke kun ved at spare tid og reducere rensningsomkostningerne for monomere forbindelser, men også ved at opretholde affiniteten af den kromatografiske søjle. Niveauet for kommercialisering af funktionelle monomerer (ligander) bestemmer dog metodens yderligere promoveringsværdi; På nuværende tidspunkt er det stadig nødvendigt at udføre derivatdesign baseret på hvert lille molekyle, hvilket har visse mangler. Hvad angår den praktiske anvendelse og fremme af denne affinitetskromatografikolonne i komplekse systemer, er der behov for yderligere forskning i efterfølgende eksperimenter.
Naturprodukter har altid været en vigtig kilde til opdagelse af nye lægemidler, og immobilisering af naturprodukter til fremstilling af tilsvarende affinitetskromatografikolonner er nyttigt for udviklingen af naturprodukter og bliver dermed et af forskningens hotspots. Denne artikel sigter mod at etablere en hurtig, effektiv og gennemførlig metode til søgning og undersøgelse af målproteiner af naturlige produkter; Samtidig giver det også en vigtig forskningsmetode og platform til at udforske interaktionen mellem små molekylære naturlige produkter og forskellige mål, som forventes at vise god effektivitet i sygdomme. Den vigtigste måde at opnå effekten på er at hæmme alfa-amylase og alfa-glucosidase og derved reducere hydrolysen af polysaccharider og fremme glycansyntese. Dette tyder på, at BA kan danne et affinitetsforhold med alfa-glucosidase og derved opnå en betydelig kromatografisk retentionseffekt. Denne undersøgelse giver et videnskabeligt grundlag for at udforske virkningsmekanismen for denne integrerede søjle, men dens specifikke anvendelse i faktiske prøver skal stadig fremmes yderligere i det efterfølgende arbejde.