Analyse af multivariate aktive komponenter i forskellige dele af trebladet klatrevin ved hjælp af UFLC-QTRAP-MS/MS-teknologi
San Ye Qing er roden eller hele planten af Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg (THDG) i druefamilien. Den har en lang historie med medicinsk brug og er en af "New Zhejiang Eight Flavors". Den virker varmeafledende og afgiftende, fremmer blodcirkulationen og fordriver vinden. Den bruges hovedsageligt til kramper med høj feber, lungebetændelse, astma, hepatitis, gigt, scrofula og skader forårsaget af fald. Moderne farmakologisk forskning har vist, at San Ye Qing har farmakologiske virkninger som anti-tumor, antioxidant, anti-inflammatorisk, antibakteriel, febernedsættende, smertestillende og immunregulerende.
Three Leaf Cliff Climbing Vine vokser hovedsageligt i den sydlige region af Yangtze-floden og har en lang historie med medicinsk brug i folkelige områder i Zhejiang. Hele planten og roden kan bruges. I de senere år har undersøgelser vist, at der er betydelige forskelle i den kemiske sammensætning og farmakologiske aktivitet blandt de forskellige medicinske dele. For eksempel er antioxidantaktiviteten i det overjordiske ekstrakt betydeligt højere end i det underjordiske ekstrakt, mens den hydroxylradikal-fjernende aktivitet i det underjordiske ekstrakt er betydeligt højere end i det overjordiske ekstrakt. Da San Ye Qing i øjeblikket kun indgår i lokale standarder og specifikationer for traditionel kinesisk medicin, er dens indikatorkomponenter ikke klart defineret. I de senere år har forskning vist, at ud over flavonoider, fenoliske syrer, polyfenoler, polysaccharider og andre aktive ingredienser i San Ye Qing har tanniner, aminosyrer og nukleosider også potentielle fysiologiske aktiviteter. Blandt dem har tanninkomponenter som anthocyaniner B2 hæmmende virkninger på mavekræft, aminosyrekomponenter har gode terapeutiske virkninger på leverskader, og nukleosidkomponenter har gode antibakterielle og antivirale virkninger. På nuværende tidspunkt fokuserer forskningen i de aktive ingredienser i forskellige dele af Three Leaf Cliff Climbing Vine hovedsageligt på de samlede flavonoider, de samlede fenoliske syrer og de samlede polysaccharider, og der er kun få samtidige indholdsbestemmelser af flere kategorier af aktive ingredienser. Analysemetoderne til kvalitetsvurdering og kontrol af forskellige dele omfatter hovedsageligt højtydende væskekromatografi, gaskromatografi-massespektrometri og væskekromatografi-massespektrometri-teknologi. For at tilvejebringe referencedata til kvalitetskontrol og rationel ressourceudnyttelse af forskellige dele af Three Leaf Cliff Climbing Vine er det derfor nødvendigt at etablere en hurtig metode til at bestemme indholdet af aktive ingredienser i forskellige dele og foretage kvalitetsevaluering.
Den ultrahurtige højtydende væskekromatografi-teknologi med tredobbelt quadrupol og lineær ionfælde-massespektrometri (UFLC-QTRAP-MS/MS) har høj separation, høj selektivitet og høj følsomhed og kan hurtigt adskille og identificere blandede forbindelser. Den er velegnet til adskillelse og analyse af komplekse systemer med flere komponenter af Trifolium repens. Derfor brugte denne undersøgelse rødder, stængler og blade af den trebladede klatrevin som forsøgsobjekter og bestemte samtidig 60 aktive ingredienser ved hjælp af UFLC-QTRAP-MS/MS-teknologi. Multivariate statistiske analysemetoder som principal component analysis (PCA), partial least squares regression analysis (PLS-DA) og variansanalyse blev brugt til at skelne og afsløre forskellene i aktive ingredienser mellem forskellige dele, og grey relational analysis (GRA) blev anvendt til at evaluere kvaliteten af forskellige dele. Resultaterne af denne undersøgelse kan give metodologiske referencer til hurtig kvantificering og kvalitetskontrol af forskellige aktive ingredienser i forskellige medicinske dele af den trebladede klatrevin og lægge grunden til en rationel udvikling og udnyttelse af dens ressourcer.

Forskningsresultaterne viser, at der er betydelige forskelle i kvaliteten af rødder, stængler og blade af Three Leaf Cliff Climbing Vine, og der er betydelige forskelle i indholdet af nogle komponenter. Otte forbindelser blev udvalgt gennem PLS-DA, VIP-værdi og variansanalyse som markører for aktive ingredienser for at skelne mellem forskellige dele. Blandt dem viste vitexin, isovitexin, paeoniflorin og isopaeoniflorin en høj til lav tendens i indhold i blade, stængler og knolde, og de var alle flavonoide kulstofglykosidforbindelser. På grund af flavonoidkulstofglycosiders stærke evne til at fjerne DPPH-radikaler kan resultaterne af dette eksperiment også give datareference til den konklusion, at antioxidantaktiviteten i den overjordiske del af Three Leaf Cliff Climbing Vine er højere end i den underjordiske del. Desuden er indholdet af proanthocyanidin B2 i stænglerne så højt som 5029,22 μ g/g, hvilket er 4 gange og 15 gange højere end i henholdsvis rødder og blade. Det har også betydelige antioxidant- og antitumoraktiviteter, hvilket indikerer, at proanthocyanidinkomponenter kan spille en vigtig rolle i metaboliske aktiviteter i forskellige dele af planten. Den relative korrelationsværdi (ri) i grå relationsanalyse kan bruges til at rangordne kvalitetsklasserne for rod-, stængel- og bladprøver. De endelige resultater viser, at bladprøverne (S7-S12) rangerer højere, hvilket indikerer, at deres kvalitet er bedre end stængel- og rodprøvernes.

Sammenfattende etablerede denne undersøgelse en metode ved hjælp af ultrahurtig højtydende væskekromatografi med tredobbelt quadrupol lineær ionfælde-massespektrometri (UFLC-QTRAP-MS/MS) til samtidig at bestemme 60 aktive ingredienser i forskellige dele af Three Leaf Cliff Climbing Vine og sammenlignede og vurderede forskellige dele ved hjælp af multivariat statistisk analyse. Resultaterne af indholdsbestemmelsen viser, at der er rigelige typer af aktive ingredienser i forskellige dele, hvoraf det samlede indhold af flere aktive ingredienser i bladene er højere end i stænglerne og knoldene. Desuden viste multivariat statistisk analyse som f.eks. hovedkomponentanalyse betydelige forskelle i de aktive ingredienser i forskellige dele af den trebladede klatrevin og afslørede otte signifikant forskellige komponenter, nemlig vitexin, isovitexin, icariin, isoicariin, proanthocyanidin B2, tyrosin, phenylalanin og leucin. Grå korrelationsanalyse indikerer, at kvaliteten af bladdele er relativt bedre, efterfulgt af stængler og knolde. Resultaterne af denne undersøgelse giver en metodisk reference til bestemmelse og kvalitetskontrol af aktive ingredienser i forskellige dele af den trebladede klatrevin og lægger grunden til en rationel udvikling og udnyttelse af dens ressourcer.